植(zhi)物(wu)（Plant）茉莉(li)酸(suan)異亮氨(an)酸(suan)（JA-Ile）ELISA檢測試(shi)劑盒(he)簡(jian)介(jie)

植(zhi)物(wu)（Plant）茉莉(li)酸(suan)異亮氨(an)酸(suan)（JA-Ile）ELISA檢測試(shi)劑盒(he)使用(yong)說明書(shu)

檢測原(yuan)理(li)

試(shi)劑盒(he)采(cai)用雙(shuang)抗(kang)體(ti)壹(yi)步夾心(xin)法(fa)酶聯(lian)免疫吸(xi)附試(shi)驗（ELISA）。往(wang)預(yu)先(xian)包被茉莉(li)酸(suan)異亮氨(an)酸(suan)（JA-Ile）抗(kang)體(ti)的(de)包被(bei)微(wei)孔中(zhong)，依(yi)次(ci)加(jia)入標本、標準品、HRP標記的(de)檢測抗(kang)體(ti)，經過(guo)溫(wen)育(yu)並(bing)*洗滌。用底(di)物(wu)TMB顯色，TMB在(zai)過(guo)氧化物(wu)酶的(de)催(cui)化(hua)下(xia)轉化成(cheng)藍色，並(bing)在酸(suan)的作用下(xia)轉化成(cheng)最(zui)終的黃(huang)色。顏(yan)色的(de)深淺和樣(yang)品(pin)中(zhong)的(de)茉(mo)莉(li)酸(suan)異亮氨(an)酸(suan)（JA-Ile）呈正(zheng)相(xiang)關(guan)。用(yong)酶標儀在(zai)450nm 波長下(xia)測(ce)定(ding)吸(xi)光度(du)（OD 值），計算(suan)樣(yang)品(pin)濃度(du)。

樣(yang)品(pin)收集(ji)、處(chu)理(li)及保存方法

1.  樣(yang)本不(bu)能(neng)含疊(die)氮(dan)鈉(na)（NaN3），因(yin)為(wei)疊氮(dan)鈉(na)（NaN3）是(shi)辣根(gen)過(guo)氧化物(wu)酶（HRP）的(de)抑(yi)制(zhi)劑。

2.  標本采集後盡早(zao)進行(xing)提取(qu)，提取(qu)按(an)相(xiang)關(guan)文(wen)獻進行(xing)。

3.  植(zhi)物(wu)萃取(qu)液或(huo)其(qi)它(ta)相(xiang)關(guan)樣(yang)本：請1000 x g離心(xin)20分(fen)鐘(zhong)，取(qu)上清(qing)即(ji)可(ke)檢測。

4.  保存：如(ru)果樣(yang)本收集後不(bu)及(ji)時檢測，請按(an)壹(yi)次(ci)用(yong)量(liang)分(fen)裝(zhuang)，凍(dong)存於-20℃，避(bi)免反(fan)復凍(dong)融，在(zai)室(shi)溫(wen)下(xia)解(jie)凍(dong)並確(que)保(bao)樣(yang)品(pin)均勻(yun)地充分(fen)解(jie)凍(dong)。

自備(bei)物(wu)品

1. 酶(mei)標儀（450nm）

2. 高精(jing)度(du)加(jia)樣(yang)器(qi)及(ji)槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒(heng)溫(wen)箱

操(cao)作註(zhu)意事項(xiang)

1.  試(shi)劑盒(he)保(bao)存在(zai)2-8℃，使用(yong)前室溫(wen)平(ping)衡20分鐘(zhong)。從冰(bing)箱取(qu)出(chu)的(de)濃縮(suo)洗滌液會(hui)有(you)結(jie)晶(jing)，這屬於正(zheng)常(chang)現(xian)象(xiang)，水浴(yu)加(jia)熱(re)使結(jie)晶(jing)*溶解(jie)後再使用(yong)。

2.  實驗中(zhong)不(bu)用(yong)的板(ban)條應立(li)即放(fang)回自封袋中(zhong)，密封（低溫(wen)幹(gan)燥(zao)）保存。

3.  濃度(du)為(wei)0的S0號(hao)標準品即(ji)可(ke)視為(wei)陰(yin)性對照或者空白；按(an)照說明書(shu)操(cao)作時樣(yang)本已經稀釋5倍，最(zui)終結果乘以5才是(shi)樣(yang)本實際(ji)濃度(du)。

4.  嚴(yan)格(ge)按(an)照說明書(shu)中(zhong)標明的(de)時間、加液(ye)量(liang)及(ji)順(shun)序(xu)進行(xing)溫(wen)育(yu)操(cao)作。

5.  所有(you)液(ye)體組(zu)分(fen)使用(yong)前充分搖勻(yun)。

註(zhu)：標準品（S0-S5）濃度(du)依(yi)次(ci)為(wei)：0、62.5、125、250、500、1000 pmol/L

試(shi)劑的(de)準備

 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾(liu)水按(an)1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾(liu)水。

洗板方法

1.  手(shou)工(gong)洗板：甩(shuai)盡孔內液(ye)體(ti)，每孔加滿(man)洗滌液，靜(jing)置1min後甩(shuai)盡孔內液(ye)體(ti)，在吸(xi)水紙(zhi)上拍幹，如此(ci)洗板5次(ci)。

2.  自動洗板機(ji)：每孔註(zhu)入洗液350μL，浸(jin)泡(pao)1min，洗板5次(ci)。

操(cao)作步驟

1.  從室(shi)溫(wen)平(ping)衡20min後的鋁箔(bo)袋中(zhong)取(qu)出(chu)所(suo)需(xu)板(ban)條，剩(sheng)余板條(tiao)用自封袋密封放回4℃。

2.  設(she)置標準品孔和樣(yang)本孔，標準品孔各加(jia)不(bu)同(tong)濃度(du)的(de)標準品50μL；

3.  樣(yang)本孔先加(jia)待(dai)測(ce)樣(yang)本10μL，再加樣(yang)本稀釋液40μL；空白孔不(bu)加(jia)。

4.  除空白孔外，標準品孔和樣(yang)本孔中(zhong)每孔加入辣(la)根過(guo)氧化物(wu)酶（HRP）標記的(de)檢測抗(kang)體(ti)100μL，用(yong)封板膜封住反(fan)應(ying)孔，37℃水浴(yu)鍋(guo)或恒(heng)溫(wen)箱溫(wen)育(yu)60min。

5.  棄(qi)去(qu)液(ye)體(ti)，吸(xi)水紙(zhi)上拍幹，每孔加滿(man)洗滌液，靜(jing)置1min，甩(shuai)去(qu)洗滌液，吸(xi)水紙(zhi)上拍幹，如此(ci)重復洗板5次(ci)（也(ye)可(ke)用洗板機(ji)洗板）。

6.  每孔加入底(di)物(wu)A、B各50μL，37℃避(bi)光孵育(yu)15min。

7.  每孔加入終止液50μL，15min內，在(zai)450nm波長處(chu)測定(ding)各孔的OD值。

結果(guo)判(pan)斷

 繪制(zhi)標準曲線：在Excel工(gong)作表中(zhong)，以標準品濃度(du)作橫坐標，對應(ying)OD值作縱坐標，繪制(zhi)出(chu)標準品線(xian)性回(hui)歸(gui)曲線，按(an)曲線方程計算(suan)各(ge)樣(yang)本濃度(du)值。

試(shi)劑盒(he)性能(neng)

1.  準確(que)性：標準品線(xian)性回(hui)歸(gui)與預期(qi)濃度(du)相(xiang)關(guan)系(xi)數R值，大於等(deng)於0.9900。

2.  靈敏(min)度(du)：檢測濃度(du)小於10 pmol/L。

3.  特異性：不(bu)與(yu)其它(ta)可(ke)溶性結(jie)構(gou)類(lei)似物(wu)交叉反(fan)應(ying)。

4.  重復性：板(ban)內、板(ban)間(jian)變異系(xi)數均小於15%。

 貯(zhu)藏(zang)：2-8℃，避(bi)光防(fang)潮保存。