人(ren)透明質(zhi)酸(suan)結(jie)合(he)蛋白(bai)ELISA試(shi)劑盒分(fen)析(xi)測(ce)定(ding)

人透明質(zhi)酸(suan)結(jie)合(he)蛋白(bai)ELISA試(shi)劑盒分(fen)析(xi)測(ce)定(ding)

樣本(ben)處理及(ji)要求

1.  血清：將(jiang)收(shou)集於血清分(fen)離(li)管的全血標本(ben)在室溫(wen)放(fang)置2小(xiao)時或(huo)4℃過夜(ye)，然後(hou)1000×g離(li)心(xin)20 分(fen)鐘(zhong)，取上清即可(ke)，或(huo)將(jiang)上清置(zhi)於(yu)-20℃或(huo)-80℃保存，但應避(bi)免反(fan)復凍(dong)融。
2.  血漿：用EDTA或(huo)肝(gan)素作為抗(kang)凝(ning)劑采(cai)集標本(ben)，並將(jiang)標本(ben)在采(cai)集後(hou)的30分(fen)鐘(zhong)內(nei)於(yu)2-8℃ 1000×g離(li)心(xin)15分(fen)鐘(zhong)，取上清即可(ke)檢(jian)測(ce)，或(huo)將(jiang)上清置(zhi)於(yu)-20℃或(huo)-80℃保存，但應避(bi)免反(fan)復凍(dong)融。
3.  組織(zhi)勻漿：用預(yu)冷(leng)的PBS (0.01M, pH=7.4)沖(chong)洗(xi)組織(zhi)，去(qu)除殘留血液（勻漿中裂解(jie)的紅細(xi)胞會影(ying)響測(ce)量(liang)結果(guo)），稱重(zhong)後(hou)將組織(zhi)剪碎。將(jiang)剪碎的組織(zhi)與(yu)對應(ying)體積的PBS（壹(yi)般(ban)按1:9的重量(liang)體積比(bi)，比如(ru)1g的組織(zhi)樣品對(dui)應(ying)9mL的PBS，具體體積可(ke)根(gen)據(ju)實驗(yan)需(xu)要適(shi)當(dang)調整，並做(zuo)好記(ji)錄(lu)。推(tui)薦在PBS中加(jia)入蛋(dan)白(bai)酶抑(yi)制(zhi)劑）加(jia)入玻璃(li)勻漿器中(zhong)，於冰(bing)上充(chong)分(fen)研磨(mo)。為了(le)進壹(yi)步裂解(jie)組織(zhi)細(xi)胞，可(ke)以對勻漿液進行超(chao)聲(sheng)破碎，或(huo)反(fan)復凍(dong)融。*後(hou)將勻漿液於(yu)5000×g離(li)心(xin)5~10分(fen)鐘(zhong)，取上清檢(jian)測(ce)。

4.  細(xi)胞培養(yang)物(wu)上清或(huo)其(qi)它生物(wu)標本(ben)：請(qing)1000×g離(li)心(xin)20分(fen)鐘(zhong)，取上清即可(ke)檢(jian)測(ce)，或(huo)將(jiang)上清置(zhi)於(yu)-20℃或(huo)-80℃保存，但應避(bi)免反(fan)復凍(dong)融。

需(xu)要而(er)未(wei)提(ti)供(gong)的試(shi)劑和器材(cai)

1. 酶標(biao)儀(yi)（450nm）

2. 高精(jing)度加(jia)樣器及(ji)槍頭(tou)：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫(wen)箱

4. 蒸(zheng)餾(liu)水(shui)或(huo)去(qu)離(li)子水(shui)

實驗(yan)結(jie)果計(ji)算

以所(suo)測(ce)標(biao)準(zhun)品的OD值為橫(heng)坐標，標準(zhun)品的濃度(du)值為縱(zong)坐標，在坐標(biao)紙上或(huo)用(yong)相關軟(ruan)件繪(hui)制(zhi)標準(zhun)曲線，並得(de)到直(zhi)線回(hui)歸方(fang)程，將樣品的OD值代入方程，計算(suan)出樣品的濃度(du)。

1. 試(shi)劑盒從(cong)冷(leng)藏環境(jing)中(zhong)取出應在室溫(wen)平衡15-30 分(fen)鐘(zhong)後(hou)方可(ke)使用(yong)，酶標(biao)包被(bei)板開封後(hou)如(ru)未用(yong)完(wan)，板條應裝(zhuang)入(ru)密封袋中(zhong)保(bao)存。

2. 濃(nong)洗(xi)滌(di)液(ye)可(ke)能(neng)會有(you)結(jie)晶析(xi)出，稀釋(shi)時可(ke)在水(shui)浴(yu)中加溫助(zhu)溶，洗(xi)滌(di)時不影(ying)響結(jie)果(guo)。

3. 各(ge)步加樣均(jun)應(ying)使用(yong)加樣器，並經(jing)常校(xiao)對其(qi)準(zhun)確(que)性(xing)，以避免試(shi)驗誤(wu)差(cha)。壹(yi)次(ci)加(jia)樣時間控制(zhi)在5 分(fen)鐘(zhong)內(nei)，如(ru)標本(ben)數量(liang)多，推(tui)薦使用(yong)排槍加(jia)樣。

4. 請(qing)每(mei)次測(ce)定(ding)的同時做(zuo)標準(zhun)曲線，建議做(zuo)復孔(kong)。如(ru)標本(ben)中待(dai)測(ce)物(wu)質含(han)量(liang)過高(gao)（樣本(ben)OD 值大於標準(zhun)品孔(kong)di壹(yi)孔(kong)的OD 值），請(qing)先(xian)用樣品稀釋(shi)液(ye)稀釋(shi)壹(yi)定(ding)倍(bei)數（n 倍(bei)）後(hou)再(zai)測(ce)定(ding)，計(ji)算時請(qing)z後(hou)乘以總稀釋(shi)倍(bei)數（×n×5）。

5. 封板膜(mo)只限(xian)壹(yi)次(ci)性(xing)使用(yong)，以避免交(jiao)叉(cha)汙染。

6. 底物(wu)請(qing)避光保(bao)存。

7. 嚴(yan)格(ge)按照(zhao)說(shuo)明書(shu)的操作進行，試(shi)驗結(jie)果判(pan)定(ding)必(bi)須以酶標儀(yi)讀數(shu)為準(zhun).

8. 所(suo)有樣品，洗(xi)滌(di)液(ye)和各(ge)種廢(fei)棄(qi)物(wu)都應(ying)按傳(chuan)染物(wu)處理。

9. 本(ben)試(shi)劑不同批(pi)號組分(fen)不得混(hun)用(yong)。

10. 試(shi)劑盒2-8℃冷(leng)藏，保質期6個月