小(xiao)鼠(shu)Elisa試(shi)劑(ji)盒(he)工作原理(li)：抗原抗體反(fan)應(ying)與(yu)信(xin)號(hao)放大

在生(sheng)命(ming)科(ke)學、醫(yi)學研究及藥(yao)物開(kai)發(fa)領域，對生(sheng)物樣(yang)本中(zhong)特定(ding)蛋白質(zhi)、抗體或(huo)細(xi)胞因子(zi)等(deng)進(jin)行精確(que)定(ding)量至(zhi)關(guan)重(zhong)要。小(xiao)鼠(shu)作(zuo)為重要(yao)的模式生(sheng)物，其相關指(zhi)標(biao)的(de)檢(jian)測需求(qiu)巨(ju)大。小(xiao)鼠(shu)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)（酶聯(lian)免疫吸附(fu)測定(ding)試劑(ji)盒(he)）正(zheng)是(shi)為此(ci)而(er)設(she)計的實(shi)驗(yan)工具(ju)，它基於(yu)抗原抗體特異性(xing)結合(he)原理(li)，借助(zhu)酶促(cu)反(fan)應(ying)放大信號(hao)，實(shi)現對目標(biao)物的(de)靈敏(min)、特異檢(jian)測。

壹(yi)、工作原理(li)：抗原抗體反(fan)應(ying)與(yu)信(xin)號(hao)放大

小(xiao)鼠(shu)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)的核(he)心工作原理(li)是(shi)抗原-抗體之間(jian)的(de)特(te)異性(xing)結合(he)反(fan)應(ying)，並(bing)通過(guo)酶(mei)催化(hua)底物產(chan)生(sheng)可(ke)測量的信號(hao)進(jin)行定(ding)量分析。基本過(guo)程(cheng)通常(chang)如(ru)下：首先(xian)將已(yi)知的抗原或(huo)抗體固定(ding)在固相載體（如聚(ju)苯(ben)乙烯微孔(kong)板(ban)）表面(mian)；接著(zhe)加(jia)入待(dai)測樣(yang)本，樣(yang)本中(zhong)的目標(biao)分子(zi)會與固相載體上的抗原或(huo)抗體結合(he)；然(ran)後(hou)加(jia)入酶(mei)標(biao)記(ji)的抗體（如壹(yi)抗或(huo)二(er)抗），與目標(biao)分子(zi)形成復合(he)物；最(zui)後(hou)加(jia)入酶(mei)促(cu)底物，酶(mei)催化(hua)底物發(fa)生(sheng)顯(xian)色(se)反(fan)應(ying)，其顏色(se)深淺與(yu)樣本中(zhong)目標(biao)分子(zi)的(de)含(han)量成正(zheng)比，通過(guo)酶(mei)標(biao)儀(yi)在450nm波(bo)長下(xia)測定(ding)吸光度值（OD值）即可(ke)進(jin)行定(ding)量分析。常(chang)見的ELISA類(lei)型(xing)包括直接法、間(jian)接法、夾心法（雙抗體夾心法）和競爭(zheng)法，適(shi)用(yong)於(yu)檢(jian)測不(bu)同(tong)分子(zi)大(da)小(xiao)的(de)抗原或(huo)抗體。例如，夾心ELISA因其高靈敏(min)度(du)和特異性(xing)，常(chang)用(yong)於(yu)檢(jian)測大(da)分子(zi)抗原。

二(er)、試(shi)劑盒(he)組(zu)成與(yu)樣本處理(li)：

•預(yu)包被(bei)的(de)微孔(kong)板(ban)：通常(chang)是(shi)96孔(kong)的(de)可(ke)拆(chai)卸板條(tiao)，孔(kong)內已(yi)包被捕獲抗體或(huo)抗原。

•標(biao)準(zhun)品(pin)：提(ti)供已(yi)知濃度(du)的標(biao)準(zhun)品(pin)，用(yong)於(yu)繪制(zhi)標(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)，計算未(wei)知(zhi)樣本濃(nong)度。

•檢(jian)測抗體：通常(chang)是(shi)酶標(biao)記(ji)的抗體。

•濃縮洗(xi)滌(di)緩(huan)沖(chong)液：如20X濃縮(suo)液，需稀釋後(hou)使(shi)用，用(yong)於(yu)洗(xi)去未結合(he)的(de)物質(zhi)。

•顯色(se)底物：如(ru)TMB（四甲(jia)基聯苯(ben)胺(an)），酶(mei)催(cui)化(hua)後(hou)會產(chan)生(sheng)顏(yan)色(se)變化(hua)。

•終止液：用於(yu)終止酶促(cu)反(fan)應(ying)。

•其他：可(ke)能(neng)包(bao)括(kuo)樣品稀釋液、封板膜(mo)、說明書等。

樣(yang)本的(de)處理(li)是(shi)確保檢(jian)測結果(guo)準(zhun)確(que)的(de)關(guan)鍵(jian)壹(yi)步。常(chang)見的可(ke)用(yong)於(yu)小(xiao)鼠(shu)ELISA檢(jian)測的(de)樣(yang)本類(lei)型(xing)包括血(xue)清、血(xue)漿(jiang)、組(zu)織勻漿(jiang)、細胞培(pei)養(yang)上(shang)清液、尿液、腦脊(ji)液等。

不(bu)同(tong)的(de)樣本類(lei)型(xing)有其特定(ding)的前(qian)處理(li)方法：

•血清：全(quan)血(xue)室(shi)溫(wen)放置2小(xiao)時(shi)或(huo)4℃過(guo)夜(ye)後(hou)，1000g離(li)心20分鐘(zhong)取上清。

•血漿：使(shi)用(yong)EDTA或(huo)肝素抗凝采集(ji)，采(cai)集(ji)後(hou)30分鐘(zhong)內於(yu)2-8℃1000g離心15分鐘(zhong)取上清。

•組(zu)織勻漿(jiang)：用預(yu)冷PBS沖(chong)洗(xi)組(zu)織並(bing)剪(jian)碎，按重(zhong)量體積比（如1:9）加(jia)入PBS在冰上研磨(mo)，離心取上清。

•細胞培(pei)養(yang)上(shang)清及其他液體樣本：通常(chang)1000g離(li)心20分鐘(zhong)取上清即可(ke)。

所有(you)樣本在處理(li)和保存(cun)過(guo)程(cheng)中都應避免反(fan)復凍(dong)融，以免影響(xiang)目標(biao)蛋白的(de)活(huo)性(xing)或(huo)結構。若樣本溶(rong)血(xue)，可(ke)能(neng)影(ying)響(xiang)最(zui)終檢(jian)測結果(guo)，不(bu)宜使用(yong)。

三(san)、小(xiao)鼠(shu)Elisa試(shi)劑(ji)盒(he)操作(zuo)流(liu)程與(yu)註意(yi)事項(xiang)：

1.準(zhun)備與預(yu)平(ping)衡：將試劑盒(he)從冷藏(zang)環(huan)境中(zhong)取出，室(shi)溫(wen)平(ping)衡30分鐘(zhong)。配(pei)制(zhi)好所需濃(nong)度(du)的洗(xi)滌(di)液（如將20X或(huo)30X濃(nong)縮(suo)洗(xi)滌(di)液稀釋）。

2.加(jia)樣：向(xiang)包被(bei)板孔(kong)中(zhong)加(jia)入稀釋好的(de)標(biao)準(zhun)品(pin)和待測樣(yang)本。每(mei)個(ge)標(biao)準(zhun)品(pin)和樣本建議做(zuo)復孔(kong)（至(zhi)少(shao)兩(liang)個(ge)重(zhong)復孔(kong)），以減少(shao)誤(wu)差(cha)。

3.孵育(yu)：加(jia)蓋封(feng)板膜(mo)，按指(zhi)定(ding)溫(wen)度(du)（常(chang)見為37℃）和時(shi)間(jian)（如(ru)30分鐘(zhong)至(zhi)1小(xiao)時(shi)）孵育(yu)，使(shi)抗原抗體充分結合(he)。

4.洗(xi)滌(di)：棄(qi)去孔(kong)內液體，用稀釋好的(de)洗(xi)滌(di)液註滿(man)各(ge)孔(kong)，靜(jing)置片(pian)刻(ke)後(hou)棄(qi)去，重復數(shu)次(ci)（通常(chang)3-5次(ci)）。洗(xi)滌(di)旨(zhi)在去除(chu)未結合(he)的(de)物質(zhi)，洗(xi)滌(di)不(bu)是(shi)導(dao)致背景(jing)偏(pian)高(gao)或(huo)結果(guo)不(bu)準(zhun)確(que)的(de)主要(yao)原因之壹(yi)。

5.加(jia)酶標(biao)抗體：每孔(kong)加(jia)入酶(mei)標(biao)抗體（如HRP標(biao)記(ji)的抗體）。

6.再(zai)次(ci)孵育(yu)與(yu)洗(xi)滌(di)：再(zai)次(ci)孵育(yu)（如(ru)37℃,30分鐘(zhong)）後(hou)，進(jin)行同樣(yang)程(cheng)序的洗(xi)滌(di)。

7.顯(xian)色(se)：每孔(kong)加(jia)入顯(xian)色(se)底物（如(ru)TMB），避光(guang)反(fan)應(ying)壹(yi)定(ding)時(shi)間(jian)（如(ru)15-30分鐘(zhong)）。

8.終(zhong)止：加(jia)入終(zhong)止液（如硫(liu)酸(suan)溶(rong)液），此(ci)時(shi)顏色(se)由藍(lan)變(bian)黃。

9.檢(jian)測：立即在酶(mei)標(biao)儀(yi)上(shang)於(yu)450nm波(bo)長讀取各(ge)孔(kong)的(de)吸光度值（OD值）。

操作(zuo)註意(yi)事項(xiang)：

•嚴格遵循(xun)說(shuo)明書：不(bu)同(tong)品(pin)牌、批號(hao)的試劑盒(he)組(zu)分不(bu)宜混用。

•控制(zhi)實(shi)驗(yan)條件(jian)：註意(yi)孵育(yu)時(shi)間(jian)和溫(wen)度(du)，大(da)量樣本時(shi)註意(yi)操(cao)作時(shi)間(jian)壹(yi)致性(xing)。

•準(zhun)確(que)移(yi)液：使用校(xiao)準(zhun)的(de)移(yi)液器，避免產(chan)生(sheng)氣(qi)泡。

•保存(cun)條(tiao)件：未使(shi)用(yong)的(de)試(shi)劑(ji)和板條應(ying)妥善保存(cun)（通常(chang)2-8℃），註意(yi)有(you)效期。

四(si)、小(xiao)鼠(shu)Elisa試(shi)劑(ji)盒(he)技(ji)術(shu)特(te)點(dian)與優(you)勢(shi)：

•高(gao)靈(ling)敏(min)度：能夠檢(jian)測到(dao)皮(pi)克/毫升（pg/mL）級(ji)別(bie)甚(shen)至(zhi)更(geng)低的微量目標(biao)分子(zi)。

•特(te)異(yi)性(xing)強(qiang)：利(li)用抗原抗體高度特異(yi)的(de)結合(he)反(fan)應(ying)，有(you)效(xiao)避(bi)免交叉(cha)反(fan)應(ying)，準(zhun)確(que)性(xing)高。

•高通量：96孔(kong)板(ban)格式便於(yu)壹(yi)次(ci)性(xing)處理(li)大量樣本，效(xiao)率高(gao)。

•操作(zuo)簡(jian)便：流程化(hua)操作(zuo)，無(wu)需非(fei)常(chang)復雜的特(te)殊(shu)儀(yi)器（主要(yao)依賴酶標(biao)儀(yi)），易於(yu)在實(shi)驗(yan)室(shi)開(kai)展。

•穩定(ding)性(xing)好：在規(gui)定(ding)的儲存(cun)條件(jian)下(xia)（通常(chang)2-8℃冷藏(zang)），試(shi)劑盒(he)在有(you)效期內能保持良(liang)好的(de)穩(wen)定(ding)性(xing)。

•適(shi)用(yong)樣本類(lei)型(xing)廣泛：血清、血(xue)漿(jiang)、組(zu)織勻漿(jiang)、細胞上(shang)清液、尿液等多種生(sheng)物液體樣本均(jun)可(ke)檢(jian)測。