小鼠ELISA試劑盒如何(he)在(zai)96孔(kong)裏(li)捕捉免(mian)疫風暴(bao)

在(zai)壹位科研(yan)人(ren)員(yuan)眼裏，壹只(zhi)20 g的小(xiao)鼠，是壹(yi)座“信息火山(shan)”。它血(xue)清(qing)裏的11 kDa抵(di)抗(kang)素(su)、1 pg級(ji)別(bie)的IL-1β，甚至(zhi)尚(shang)未被命名(ming)的細(xi)胞(bao)因(yin)子(zi)，都可(ke)能(neng)在下(xia)壹(yi)秒(miao)掀起(qi)壹(yi)場免(mian)疫風暴(bao)。要把(ba)這(zhe)些轉瞬即(ji)逝的信(xin)號“凝(ning)固(gu)”成可(ke)量化(hua)的數(shu)據(ju)，靠的是(shi)壹只(zhi)只(zhi)看似(si)平凡(fan)的小(xiao)鼠ELISA試劑盒——壹塊96孔(kong)板(ban)，就是它(ta)們(men)的戰(zhan)場。

壹、從(cong)“火(huo)山”到(dao)“坐標”：試劑盒的工(gong)作邏輯(ji)

小鼠ELISA試劑盒的核(he)心(xin)是“雙(shuang)抗(kang)體(ti)夾(jia)心(xin)法(fa)”。以(yi)檢(jian)測(ce)小(xiao)鼠IL-1β為例(li)：

1.預包(bao)被(bei)在(zai)孔(kong)底的捕(bu)獲抗(kang)體(ti)像(xiang)“漁(yu)網”，專(zhuan)捕(bu)IL-1β；

2.加(jia)入(ru)樣(yang)品(pin)後(hou)，目(mu)標分(fen)子被“黏(nian)”在孔(kong)底；

3.生(sheng)物素(su)化(hua)的檢(jian)測(ce)抗(kang)體(ti)再(zai)補壹刀，形(xing)成“抗(kang)體(ti)-抗(kang)原(yuan)-抗(kang)體(ti)”三(san)明治(zhi)；

4.最(zui)後(hou)由鏈黴親(qin)和素(su)-HRP與(yu)TMB底物顯(xian)色(se)，450 nm處(chu)壹(yi)記吸光(guang)度(du)，IL-1β的濃度(du)便被(bei)“解(jie)碼(ma)”。

整個(ge)過(guo)程只(zhi)需(xu)90 min，靈(ling)敏(min)度(du)卻(que)可(ke)到(dao)1 pg/ml，相(xiang)當(dang)於(yu)在(zai)25個(ge)標準(zhun)泳(yong)池(chi)裏找(zhao)到(dao)壹(yi)滴(di)墨水。

二(er)、壹盒多用：血(xue)清(qing)、組織(zhi)、漱口水(shui)都能(neng)測(ce)

小(xiao)鼠ELISA並不(bu)挑(tiao)剔(ti)樣(yang)本——

•血(xue)清(qing)、血(xue)漿：分(fen)離後1000×g離(li)心(xin)20 min即可(ke)；

•組織(zhi)勻(yun)漿：肺(fei)、腦、脂肪，研(yan)磨(mo)後超(chao)聲破碎(sui)，5000×g離(li)心(xin)取(qu)上(shang)清(qing)；

•細胞(bao)上(shang)清(qing)：刺激後(hou)的巨(ju)噬細(xi)胞(bao)、3D腦類(lei)器官(guan)，可(ke)直接加(jia)樣(yang)；

•特(te)殊(shu)體(ti)液(ye)：支(zhi)氣管(guan)灌(guan)洗液(ye)、羊(yang)水(shui)、腦脊(ji)液(ye)，甚至(zhi)尿(niao)液(ye)也能(neng)照單(dan)全收(shou)。

只(zhi)要(yao)樣(yang)本裏(li)存(cun)在(zai)目標蛋白，試劑盒就能(neng)把(ba)它(ta)“讀(du)”出(chu)來(lai)。

三(san)、四幕(mu)實(shi)驗速(su)寫

速(su)寫(xie)A：肥(fei)胖研(yan)究(jiu)

高(gao)脂飲食(shi)小鼠血(xue)清(qing)Resistin飆升至(zhi)8 ng/ml，提(ti)示(shi)胰(yi)島(dao)素抵抗(kang)風險；碧(bi)雲天試劑盒檢測(ce)下(xia)限(xian)17.8 pg/ml，讓(rang)早(zao)期變(bian)化(hua)無(wu)所遁形(xing)。

速寫B：膿毒(du)癥模(mo)型(xing)

CLP術後6 h，IL-1β從基線15 pg/ml暴(bao)漲至(zhi)1240 pg/ml，賽(sai)默(mo)飛(fei)試劑盒板(ban)內(nei)CV僅(jin)2.2%，確(que)保多組數(shu)據(ju)可(ke)比。

速寫(xie)C：阿爾茨(ci)海(hai)默(mo)病(bing)

腦組織(zhi)勻(yun)漿中IL-13低至(zhi)5 pg/ml，Abcam SimpleStep技(ji)術90 min出結(jie)果，為快(kuai)速篩選抗(kang)炎(yan)藥(yao)贏得(de)時(shi)間。

速(su)寫D：腫(zhong)瘤(liu)微環境(jing)

可(ke)溶性IL-2受體(ti)（sIL-2R）在(zai)荷瘤小(xiao)鼠血(xue)漿中升高(gao)3.7倍，回(hui)收(shou)率(lv)98%的試劑盒讓(rang)藥效(xiao)評估更可(ke)信。

四、選購(gou)與(yu)避坑(keng)指南

1.靈(ling)敏度(du)：炎(yan)癥早(zao)期選1 pg/ml級(ji)；普(pu)通(tong)篩選10 pg/ml即(ji)可(ke)。

2.特(te)異(yi)性：查看交(jiao)叉(cha)反(fan)應列(lie)表，避(bi)免(mian)與(yu)家族(zu)蛋(dan)白“串臺(tai)”。

3.重復性：板(ban)內(nei)/板(ban)間CV應(ying)<10%；要(yao)求發表(biao)文章最(zui)好(hao)<5%。

4.樣(yang)本體(ti)積(ji)：小(xiao)鼠尾血(xue)僅50µL，選微量孔(kong)板(ban)（50µL體(ti)系）更省(sheng)樣(yang)品(pin)。

5.批(pi)次壹致：同壹縱(zong)向實(shi)驗盡(jin)量同(tong)壹(yi)批(pi)號(hao)，批(pi)間(jian)差可(ke)控(kong)制(zhi)在(zai)8%以(yi)內(nei)。

五、未來：從“單(dan)指標”到(dao)“免(mian)疫指紋(wen)”

下(xia)壹代小(xiao)鼠多因(yin)子(zi)ELISA正在(zai)96孔(kong)裏(li)布下(xia)10重熒光(guang)陣(zhen)列，壹(yi)次讀板(ban)即可(ke)同時(shi)捕獲(huo)IL-1β、IL-6、TNF-α、Resistin等10種(zhong)炎(yan)癥因(yin)子(zi)，配合AI算(suan)法(fa)在5分(fen)鐘(zhong)內(nei)生(sheng)成(cheng)“免(mian)疫風暴(bao)雷(lei)達圖(tu)”。屆(jie)時(shi)，壹只(zhi)小(xiao)鼠只(zhi)需(xu)30µL血(xue)，就能(neng)為代(dai)謝(xie)病(bing)、感染、腫(zhong)瘤(liu)三(san)種(zhong)模(mo)型(xing)同時(shi)提供(gong)決策數(shu)據(ju)。

壹塊96孔(kong)板(ban)、兩支(zhi)抗(kang)體(ti)、壹(yi)滴(di)顯(xian)色(se)液(ye)，小鼠ELISA試劑盒用0.1 pg的分(fen)辨(bian)率(lv)，把(ba)隱(yin)藏在血(xue)清(qing)、細胞(bao)、組織(zhi)裏的免(mian)疫信號翻(fan)譯成可(ke)繪(hui)制(zhi)的曲線、可(ke)發表(biao)的圖(tu)表、可(ke)上(shang)市的藥(yao)物。它(ta)讓(rang)每壹(yi)次小鼠的呼(hu)吸、每(mei)壹(yi)次細胞(bao)的顫(chan)動，都(dou)變(bian)成人類(lei)理(li)解疾病的註(zhu)腳。下次再看到(dao)實(shi)驗鼠，請(qing)記住：在(zai)它的血(xue)裏，壹(yi)場0.1 pg量級(ji)的戰(zhan)爭，正(zheng)被(bei)壹只(zhi)試劑盒悄悄(qiao)記錄。