ADH，使(shi)用(yong)犬抗(kang)利(li)尿(niao)激素(su)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)需(xu)要註(zhu)意(yi)什(shen)麽？

ADH，使(shi)用(yong)犬抗(kang)利(li)尿(niao)激素(su)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)需(xu)要註(zhu)意(yi)什(shen)麽？

試(shi)劑(ji)盒(he)采用(yong)雙抗(kang)體壹步夾心法酶聯免(mian)疫(yi)吸附試(shi)驗（ELISA）。往預(yu)先(xian)包(bao)被(bei)犬抗(kang)利(li)尿(niao)激素(su)（ADH）捕獲(huo)抗體的包被(bei)微孔(kong)中，依(yi)次(ci)加(jia)入(ru)標本(ben)、標準(zhun)品(pin)、HRP標記(ji)的檢測抗(kang)體，經過溫育(yu)並(bing)洗(xi)滌(di)。用(yong)底物TMB顯色(se)，TMB在(zai)過氧化物酶的催(cui)化下(xia)轉(zhuan)化成(cheng)藍色(se)，並(bing)在酸(suan)的作(zuo)用(yong)下(xia)轉(zhuan)化成(cheng)最(zui)終的黃(huang)色。顏(yan)色(se)的深淺和(he)樣品(pin)中的犬抗(kang)利(li)尿(niao)激素(su)（ADH）呈正相(xiang)關。用(yong)酶標儀(yi)在450nm 波(bo)長(chang)下(xia)測(ce)定(ding)吸光度（OD 值(zhi)），計(ji)算樣品濃度。

1.  檢測範(fan)圍(wei)：1 pg/mL – 32 pg/mL。

2.  靈(ling)敏度：檢測(ce)濃(nong)度小(xiao)於0.1 pg/mL。

3.  特異性：不與(yu)其(qi)它(ta)可溶(rong)性結構(gou)類(lei)似物交叉(cha)反(fan)應(ying)。

 重復性：板(ban)內變異系(xi)數小(xiao)於10% ，板(ban)間變異系(xi)數小(xiao)於15%

犬抗(kang)利(li)尿(niao)激素(su)（ADH）ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)的工(gong)作(zuo)原(yuan)理(li)基(ji)於酶聯免(mian)疫(yi)吸附測(ce)定(ding)（ELISA）技術(shu)，具(ju)體流程(cheng)如下(xia)：

1. ‌固(gu)相(xiang)抗原(yuan)包(bao)被(bei)‌

微孔(kong)板(ban)預(yu)先(xian)包(bao)被(bei)與(yu)犬ADH結(jie)構(gou)相(xiang)似的抗原(yuan)（可(ke)能(neng)為重(zhong)組ADH或合成(cheng)多肽(tai)）‌27。該抗原(yuan)通(tong)過物理吸附固(gu)定(ding)在(zai)孔(kong)板(ban)表(biao)面(mian)，保留(liu)免(mian)疫(yi)學活(huo)性‌46。

2. ‌競爭(zheng)性結合反應(ying)‌

• ‌樣(yang)品(pin)/標準(zhun)品(pin)處(chu)理(li)‌：待(dai)測(ce)犬樣(yang)本(ben)（如(ru)血清、血漿）中的ADH與(yu)生物素標記(ji)的ADH類似物同(tong)時(shi)加(jia)入(ru)孔(kong)板(ban)‌78。

• ‌競爭(zheng)結合‌：樣本中的天(tian)然ADH與(yu)生物素標記(ji)的ADH競爭(zheng)結合孔(kong)板(ban)中有限的ADH特異性抗體結合位點(dian)‌37。ADH濃(nong)度越高(gao)，與(yu)抗體結合的生物素標記(ji)ADH越(yue)少(shao)，形成(cheng)競爭(zheng)性抑(yi)制(zhi)關系(xi)‌38。

3. ‌洗(xi)滌(di)與(yu)信號放(fang)大(da)‌

• ‌去(qu)除(chu)未(wei)結(jie)合物質(zhi)‌：洗(xi)滌(di)去(qu)除未(wei)結(jie)合的遊離(li)ADH和(he)抗體復合物‌46。

• ‌酶標二抗結(jie)合‌：加(jia)入(ru)辣(la)根過氧化物酶（HRP）標記(ji)的鏈黴親(qin)和(he)素，與(yu)生物素標記(ji)的ADH-抗體復合物結合‌38。

4. ‌顯色(se)與(yu)定(ding)量分(fen)析(xi)‌

• ‌底(di)物反應(ying)‌：加(jia)入(ru)TMB顯色(se)底(di)物，HRP催(cui)化底物生成(cheng)藍色(se)產(chan)物，反應(ying)終止後變為(wei)黃(huang)色‌46。

• ‌濃(nong)度計(ji)算‌：通過檢測450 nm波(bo)長(chang)下(xia)的吸光度值(zhi)，吸光度與(yu)樣本(ben)中ADH濃度呈負相(xiang)關（即(ji)ADH濃度越高(gao)，顯色(se)越(yue)淺）‌37。標準(zhun)曲(qu)線法可(ke)精(jing)確計(ji)算ADH濃度‌38。

‌技術(shu)特(te)點(dian)‌

• ‌檢(jian)測範(fan)圍(wei)‌：通(tong)常覆(fu)蓋pg/ml級別(bie)（如(ru)0.781-50 pg/ml），靈(ling)敏度高‌37。

• ‌特(te)異性‌：依(yi)賴(lai)抗體對ADH的特異性識別，可(ke)排除(chu)其(qi)他(ta)類(lei)似結構幹(gan)擾(rao)‌27。

• ‌應(ying)用(yong)場景(jing)‌：適用(yong)於犬體液樣本(ben)中ADH的定(ding)量檢(jian)測，用(yong)於研(yan)究水(shui)電(dian)解(jie)質(zhi)平(ping)衡(heng)、腎功(gong)能(neng)異常等(deng)‌

•