小鼠(shu)腎母細(xi)胞過(guo)度表(biao)達(da)基因(yin)(NOV/CCN3) 酶(mei)聯免(mian)疫吸(xi)附測定試(shi)劑(ji)盒

l 本試(shi)劑(ji)盒用(yong)於(yu)體外定量(liang)檢(jian)測(ce)血(xue)清、血(xue)漿(jiang)、組(zu)織(zhi)勻(yun)漿(jiang)及相(xiang)關(guan)液體(ti)樣(yang)本中小(xiao)鼠(shu)腎母細(xi)胞過(guo)度表(biao)達(da)基因(yin)(NOV/CCN3)的(de)含量(liang)。

l 有效期(qi)：6個(ge)月(yue)

l 保存(cun)條(tiao)件：2-8℃

試(shi)劑(ji)盒組成(cheng)：

備註(zhu)：

1. （96T/48T）打開(kai)包裝(zhuang)後(hou)請及時(shi)檢查(zha)所有物(wu)品是(shi)否(fou)齊(qi)全(quan)。

2. 標(biao)準(zhun)品濃度依(yi)次(ci)為：2400、1200、600、300、150、0 pg/ml

3. 經過大量(liang)正(zheng)常(chang)標(biao)本(ben)檢驗，標(biao)本(ben)的正(zheng)常(chang)濃度值(zhi)均(jun)在(zai)試(shi)劑(ji)盒提供的(de)檢(jian)測範(fan)圍內，實(shi)驗過(guo)程中直(zhi)接取(qu)50μL樣(yang)本(ben)上樣即可(ke)。當(dang)有部分(fen)樣(yang)本值超(chao)過最(zui)大標(biao)準(zhun)品濃度時(shi)，可(ke)用(yong)樣本稀釋(shi)液將標(biao)本(ben)進行適(shi)當(dang)稀釋(shi)後(hou)再進行實(shi)驗。

檢(jian)測(ce)前準(zhun)備工作(zuo)：

1. 請(qing)提前20分鐘(zhong)從(cong)冰箱(xiang)中取(qu)出(chu)試(shi)劑(ji)盒，平衡(heng)至(zhi)室溫。

2. 從(cong)冰箱(xiang)中取(qu)出(chu)的(de)濃縮洗滌液可(ke)能有結(jie)晶(jing)，屬於(yu)正常(chang)現象(xiang)；放(fang)置(zhi)室溫，輕(qing)搖均勻(yun)，待結(jie)晶(jing)溶(rong)解後(hou)再配(pei)置(zhi)洗滌液。可(ke)將20ml濃縮洗滌液用(yong)蒸(zheng)餾水或(huo)去(qu)離子水稀(xi)釋(shi)配(pei)置(zhi)成(cheng)400ml工作(zuo)濃度的(de)洗滌液，未(wei)用(yong)完的放回(hui)4℃

3. 20×洗滌緩沖(chong)液的(de)稀(xi)釋(shi)：蒸(zheng)餾水按(an)1：20稀(xi)釋(shi)，即1份20×洗滌緩沖(chong)液加19份蒸(zheng)餾水。。

實(shi)驗原理：

試(shi)劑(ji)盒采用(yong)雙抗體壹步(bu)夾心法(fa)酶(mei)聯免(mian)疫吸(xi)附試驗（ELISA）。往預先(xian)包(bao)被小鼠(shu)腎母細(xi)胞過(guo)度表(biao)達(da)基因(yin)(NOV/CCN3)捕(bu)獲(huo)抗體的(de)包被微(wei)孔中，依(yi)次(ci)加入(ru)標(biao)本(ben)、標(biao)準(zhun)品、HRP標(biao)記(ji)的檢(jian)測(ce)抗體，經(jing)過溫育(yu)並洗滌。用(yong)底物(wu)TMB顯色，TMB在過(guo)氧(yang)化物(wu)酶的(de)催(cui)化下轉(zhuan)化成(cheng)藍(lan)色，並在酸的作(zuo)用(yong)下轉(zhuan)化成(cheng)最(zui)終的黃色。顏色的深淺(qian)和(he)樣品中的(de)小(xiao)鼠(shu)腎母細(xi)胞過(guo)度表(biao)達(da)基因(yin)(NOV/CCN3)呈(cheng)正(zheng)相(xiang)關(guan)。用(yong)酶標(biao)儀在(zai)450nm 波長下測(ce)定吸(xi)光度（OD 值(zhi)），計(ji)算(suan)樣(yang)品(pin)濃度。

實(shi)驗所(suo)需(xu)自(zi)備試(shi)驗器(qi)材(cai)：

1. 酶標(biao)儀（450nm）

2. 高(gao)精(jing)度加樣器(qi)及槍頭(tou)：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱(xiang)

4. 蒸(zheng)餾水或(huo)去(qu)離子水

樣(yang)本(ben)處理及要(yao)求(qiu)：

1. 血(xue)清：將收(shou)集於(yu)血(xue)清分(fen)離管(guan)的(de)全(quan)血(xue)標(biao)本(ben)在室溫放(fang)置2小(xiao)時或(huo)4℃過夜(ye)，然(ran)後1000×g離心20 分(fen)鐘(zhong)，取(qu)上清即可(ke)，或將上清置(zhi)於(yu)-20℃或-80℃保存(cun)，但應(ying)避(bi)免(mian)反(fan)復凍融。

2. 血(xue)漿(jiang)：用(yong)EDTA或肝素作(zuo)為抗凝(ning)劑(ji)采(cai)集(ji)標(biao)本(ben)，並將標(biao)本(ben)在采(cai)集(ji)後(hou)的(de)30分(fen)鐘(zhong)內於(yu)2-8℃ 1000×g離心15分(fen)鐘(zhong)，取(qu)上清即可(ke)檢測(ce)，或(huo)將上清置(zhi)於(yu)-20℃或-80℃保存(cun)，但應(ying)避(bi)免(mian)反(fan)復凍融。

3. 組織(zhi)勻(yun)漿(jiang)：用(yong)預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖(chong)洗組(zu)織(zhi)，去(qu)除殘留血(xue)液（勻(yun)漿(jiang)中裂解的(de)紅細(xi)胞會(hui)影(ying)響(xiang)測量(liang)結(jie)果(guo)），稱(cheng)重(zhong)後(hou)將組(zu)織(zhi)剪(jian)碎(sui)。將剪(jian)碎(sui)的(de)組織(zhi)與(yu)對應(ying)體(ti)積的(de)PBS（壹般按1:9的(de)重量(liang)體(ti)積比(bi)，比(bi)如(ru)1g的組(zu)織(zhi)樣(yang)品(pin)對應(ying)9mL的(de)PBS，具(ju)體(ti)體(ti)積可(ke)根(gen)據(ju)實(shi)驗需(xu)要(yao)適(shi)當(dang)調整(zheng)，並做好記(ji)錄(lu)。推薦(jian)在PBS中加入(ru)蛋(dan)白(bai)酶(mei)抑制(zhi)劑(ji)）加入(ru)玻(bo)璃勻(yun)漿(jiang)器(qi)中，於(yu)冰上充(chong)分研(yan)磨(mo)。為了(le)進壹步(bu)裂解組(zu)織(zhi)細(xi)胞，可(ke)以對勻(yun)漿(jiang)液進行超(chao)聲(sheng)破(po)碎(sui)，或反(fan)復(fu)凍融。最後(hou)將勻(yun)漿(jiang)液於(yu)5000×g離心5~10分(fen)鐘(zhong)，取(qu)上清檢(jian)測(ce)。

4. 細胞培(pei)養物(wu)上清：請(qing)1000×g離心20分(fen)鐘(zhong)，取(qu)上清即可(ke)檢測(ce)，或(huo)將上清置(zhi)於(yu)-20℃或-80℃保存(cun)，但應(ying)避(bi)免(mian)反(fan)復凍融。

5. 其它(ta)生(sheng)物(wu)標(biao)本(ben)：1000×g離心20分(fen)鐘(zhong)，取(qu)上清即可(ke)檢測(ce)。

6. 樣(yang)品(pin)外觀：樣(yang)品(pin)應(ying)清澈(che)透明，懸(xuan)浮物(wu)應(ying)離心去(qu)除。

7. 樣品(pin)保存(cun)：樣品(pin)收(shou)集後若在1周(zhou)內進行檢(jian)測的(de)可(ke)保存(cun)於(yu)4℃，若不(bu)能及時(shi)檢測(ce)，請按壹次(ci)使(shi)用(yong)量(liang)分(fen)裝(zhuang)，凍存(cun)於(yu)-20℃（1個月(yue)內檢(jian)測(ce)），或(huo)-80℃（6個月(yue)內檢(jian)測(ce)），避(bi)免(mian)反(fan)復凍融，標(biao)本(ben)溶(rong)血(xue)會(hui)影(ying)響(xiang)最後(hou)檢(jian)測結(jie)果(guo)，因此(ci)溶(rong)血(xue)標(biao)本(ben)不(bu)宜進行此(ci)項檢測。

註(zhu)意(yi)事(shi)項：

1. 嚴格按照規(gui)定的(de)時間和(he)溫度進行溫育(yu)以保證(zheng)準(zhun)確(que)結(jie)果(guo)。所有試劑(ji)都必(bi)須(xu)在使(shi)用(yong)前達(da)到室溫20-25℃。使(shi)用(yong)後立即冷藏保存(cun)試劑(ji)。

2. 洗板(ban)不(bu)正確(que)可(ke)以導致不(bu)準確(que)的(de)結(jie)果(guo)。在加入(ru)底物(wu)前確(que)保盡量(liang)吸(xi)幹孔內液體(ti)。溫育(yu)過程中不(bu)要讓(rang)微(wei)孔幹燥掉(diao)。

3. 消除板底殘留的(de)液體(ti)和(he)手指(zhi)印，否(fou)則影(ying)響(xiang)OD值。

4. 底物(wu)顯色液應(ying)呈(cheng)無(wu)色或很(hen)淺(qian)的(de)顏(yan)色，已經變藍(lan)的底物(wu)液不(bu)能使(shi)用(yong)。

5. 避免(mian)試(shi)劑(ji)和(he)標(biao)本(ben)的交(jiao)叉(cha)汙(wu)染(ran)以免(mian)造(zao)成(cheng)錯(cuo)誤(wu)結(jie)果(guo)。

6. 在儲存(cun)和(he)溫育(yu)時避(bi)免(mian)強(qiang)光直(zhi)接照射(she)。

7. 平衡(heng)至(zhi)室溫後(hou)再打(da)開(kai)密封袋(dai)以防(fang)水滴(di)凝(ning)聚(ju)在冷板條(tiao)上。

8. 任(ren)何反應(ying)試(shi)劑(ji)不(bu)能接(jie)觸(chu)漂(piao)白(bai)溶(rong)劑(ji)或(huo)漂(piao)白(bai)溶(rong)劑(ji)所(suo)散(san)發的(de)強(qiang)烈氣體。任(ren)何漂(piao)白(bai)成(cheng)分(fen)都會(hui)破(po)壞(huai)試劑(ji)盒中反(fan)應(ying)試(shi)劑(ji)的(de)生(sheng)物(wu)活性。

9. 不(bu)能使(shi)用(yong)過期產品。

10. 如(ru)果可(ke)能傳(chuan)播疾(ji)病，所(suo)有的樣(yang)品(pin)都應(ying)管(guan)理好，按(an)照規(gui)定的(de)程序(xu)處理樣(yang)品和(he)檢測裝(zhuang)置(zhi)。

實(shi)驗結(jie)果(guo)計算：

繪(hui)制(zhi)標(biao)準(zhun)曲線：以所測標(biao)準(zhun)品的(de)OD值(zhi)為橫坐(zuo)標(biao)，標(biao)準(zhun)品的(de)濃度值(zhi)為縱(zong)坐標(biao)，在(zai)坐標(biao)紙(zhi)上或用(yong)相(xiang)關(guan)軟件繪(hui)制(zhi)標(biao)準(zhun)曲線，並得到(dao)直(zhi)線回(hui)歸(gui)方程，將樣(yang)品(pin)的OD值(zhi)代(dai)入(ru)方程，計(ji)算出樣(yang)品(pin)的(de)濃度。

試(shi)劑(ji)盒性能：

1. 檢(jian)測(ce)範(fan)圍：10.0 pg/ml –2400 pg/ml。

2. 靈敏(min)度：檢(jian)測(ce)濃度小(xiao)於(yu)10.0 pg/ml。

3. 特異性：不(bu)與(yu)其它可(ke)溶(rong)性結(jie)構(gou)類似(si)物(wu)交叉(cha)反應(ying)。

重(zhong)復(fu)性：板內變異系(xi)數(shu)小於(yu)10% ，板間(jian)變異系(xi)數(shu)小於(yu)15% 。