小鼠(shu)骨(gu)橋素（OPN）試(shi)劑(ji)盒（ELISA） 使(shi)用(yong)說明書(shu)

小(xiao)鼠(shu)骨(gu)橋素（OPN）試(shi)劑(ji)盒（ELISA）

使(shi)用(yong)說明書(shu)

l 本(ben)試(shi)劑(ji)盒用(yong)於(yu)體(ti)外(wai)定量(liang)檢測(ce)血(xue)清(qing)、血漿(jiang)、組織勻(yun)漿及(ji)相(xiang)關液體(ti)樣(yang)本(ben)中(zhong)小(xiao)鼠(shu)骨(gu)橋素（OPN）的(de)含(han)量(liang)。

l 有(you)效(xiao)期：6個(ge)月(yue)

l 保(bao)存(cun)條(tiao)件：2-8℃

l 本(ben)試(shi)劑(ji)盒僅(jin)供(gong)科研(yan)使(shi)用(yong)，不(bu)得用(yong)於(yu)臨床(chuang)診(zhen)斷

實(shi)驗(yan)原(yuan)理

試(shi)劑(ji)盒采用(yong)雙抗體(ti)壹(yi)步夾(jia)心(xin)法酶聯免疫吸附試(shi)驗（ELISA）。往(wang)預(yu)先(xian)包被(bei)小(xiao)鼠(shu)骨(gu)橋素（OPN）捕(bu)獲抗體(ti)的(de)包被(bei)微孔(kong)中(zhong)，依次(ci)加(jia)入標(biao)本(ben)、標(biao)準(zhun)品、HRP標(biao)記(ji)的(de)檢(jian)測(ce)抗體(ti)，經(jing)過(guo)溫(wen)育(yu)並*洗(xi)滌(di)。用(yong)底物TMB顯色(se)，TMB在(zai)過(guo)氧化(hua)物酶的(de)催化下轉(zhuan)化(hua)成藍(lan)色(se)，並(bing)在(zai)酸的(de)作(zuo)用(yong)下轉(zhuan)化(hua)成最終的(de)黃(huang)色(se)。顏(yan)色的(de)深(shen)淺(qian)和樣(yang)品中(zhong)的(de)小(xiao)鼠(shu)骨(gu)橋素（OPN）呈(cheng)正(zheng)相(xiang)關。用(yong)酶標(biao)儀(yi)在(zai)450nm 波長下測定吸光度（OD 值(zhi)），計算樣(yang)品濃(nong)度。

樣(yang)本(ben)處(chu)理(li)及(ji)要(yao)求(qiu)

1.  血(xue)清(qing)：將(jiang)收(shou)集(ji)於(yu)血(xue)清(qing)分離(li)管(guan)的(de)全(quan)血(xue)標(biao)本(ben)在(zai)室(shi)溫(wen)放置2小(xiao)時(shi)或4℃過(guo)夜(ye)，然(ran)後(hou)1000×g離(li)心(xin)20 分(fen)鐘(zhong)，取(qu)上(shang)清(qing)即(ji)可，或(huo)將上(shang)清(qing)置於(yu)-20℃或(huo)-80℃保(bao)存(cun)，但應(ying)避免反(fan)復(fu)凍融(rong)。

2.  血(xue)漿(jiang)：用(yong)EDTA或(huo)肝素作(zuo)為(wei)抗凝劑(ji)采集(ji)標(biao)本(ben)，並(bing)將標(biao)本(ben)在(zai)采集(ji)後(hou)的(de)30分(fen)鐘(zhong)內於(yu)2-8℃ 1000×g離(li)心(xin)15分(fen)鐘(zhong)，取(qu)上(shang)清(qing)即(ji)可檢(jian)測，或將(jiang)上(shang)清(qing)置於(yu)-20℃或(huo)-80℃保(bao)存(cun)，但應(ying)避免反(fan)復(fu)凍融(rong)。

3.  組織勻(yun)漿：用(yong)預冷(leng)的(de)PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗(xi)組織，去(qu)除殘(can)留血(xue)液（勻(yun)漿(jiang)中(zhong)裂解(jie)的(de)紅(hong)細(xi)胞(bao)會影響(xiang)測(ce)量(liang)結(jie)果），稱(cheng)重(zhong)後(hou)將(jiang)組織剪碎(sui)。將(jiang)剪碎(sui)的(de)組織與對(dui)應(ying)體(ti)積(ji)的(de)PBS（壹(yi)般(ban)按1:9的(de)重(zhong)量(liang)體(ti)積(ji)比(bi)，比(bi)如1g的(de)組織樣(yang)品對(dui)應(ying)9mL的(de)PBS，具(ju)體(ti)體(ti)積(ji)可(ke)根據(ju)實(shi)驗需要(yao)適當調整(zheng)，並(bing)做好(hao)記(ji)錄。推(tui)薦(jian)在(zai)PBS中(zhong)加(jia)入蛋白(bai)酶抑制(zhi)劑(ji)）加入玻璃(li)勻(yun)漿(jiang)器(qi)中(zhong)，於(yu)冰(bing)上(shang)充分(fen)研(yan)磨(mo)。為了進(jin)壹(yi)步裂(lie)解(jie)組織細(xi)胞(bao)，可以(yi)對(dui)勻漿(jiang)液進(jin)行(xing)超聲(sheng)破(po)碎(sui)，或反(fan)復凍融(rong)。最後(hou)將(jiang)勻(yun)漿(jiang)液於(yu)5000×g離(li)心(xin)5~10分(fen)鐘(zhong)，取(qu)上(shang)清(qing)檢測(ce)。

4.  細(xi)胞(bao)培養物上(shang)清(qing)或其它(ta)生(sheng)物標(biao)本(ben)：請(qing)1000×g離(li)心(xin)20分(fen)鐘(zhong)，取(qu)上(shang)清(qing)即(ji)可檢(jian)測，或將(jiang)上(shang)清(qing)置於(yu)-20℃或(huo)-80℃保(bao)存(cun)，但應(ying)避免反(fan)復(fu)凍融(rong)。

註(zhu)：標(biao)本(ben)溶血(xue)會(hui)影響(xiang)最後(hou)檢(jian)測(ce)結(jie)果，因(yin)此溶血(xue)標(biao)本(ben)不(bu)宜(yi)進(jin)行(xing)此項(xiang)檢測(ce)。

需要(yao)而未提供(gong)的(de)試(shi)劑(ji)和器(qi)材(cai)

1. 酶標(biao)儀(yi)（450nm）

2. 高精(jing)度加樣(yang)器(qi)及(ji)槍頭(tou)：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒(heng)溫(wen)箱(xiang)

4. 蒸(zheng)餾(liu)水(shui)或(huo)去(qu)離(li)子水

試(shi)劑(ji)盒組成

備(bei)註(zhu)：

1.  標(biao)準(zhun)品濃(nong)度依次(ci)為(wei)：200、100、50、25、12.5、6.25 ng/mL

2.  經(jing)過(guo)大量(liang)正(zheng)常標(biao)本(ben)檢(jian)驗，標(biao)本(ben)的(de)正(zheng)常濃度值(zhi)均(jun)在(zai)試(shi)劑(ji)盒提(ti)供(gong)的(de)檢(jian)測(ce)範(fan)圍(wei)內，實驗過(guo)程(cheng)中(zhong)直(zhi)接取(qu)50μL樣(yang)本(ben)上(shang)樣(yang)即(ji)可。當(dang)有(you)部(bu)分(fen)樣(yang)本(ben)值(zhi)超過(guo)最大標(biao)準(zhun)品濃(nong)度時(shi)，可用(yong)樣(yang)本(ben)稀釋(shi)液將(jiang)標(biao)本(ben)進(jin)行(xing)適當稀釋(shi)後(hou)再(zai)進(jin)行(xing)實(shi)驗(yan)。

註(zhu)意事項(xiang)

1. 嚴(yan)格(ge)按照(zhao)規定的(de)時(shi)間(jian)和(he)溫(wen)度進(jin)行(xing)溫(wen)育(yu)以保(bao)證(zheng)準確(que)結(jie)果。所有(you)試劑(ji)都必須在(zai)使(shi)用(yong)前達(da)到(dao)室(shi)溫(wen)20-25℃。使(shi)用(yong)後(hou)立(li)即(ji)冷(leng)藏(zang)保(bao)存試劑(ji)。

2. 洗(xi)板(ban)不(bu)正(zheng)確(que)可(ke)以導(dao)致不(bu)準確(que)的(de)結(jie)果。在(zai)加(jia)入底物前確保(bao)盡(jin)量(liang)吸幹孔(kong)內液體(ti)。溫(wen)育(yu)過程(cheng)中(zhong)不(bu)要讓(rang)微孔(kong)幹(gan)燥掉。

3. 消(xiao)除板(ban)底(di)殘(can)留的(de)液體(ti)和(he)手(shou)指(zhi)印(yin)，否則(ze)影響(xiang)OD值(zhi)。

4. 底(di)物顯色(se)液應(ying)呈(cheng)無(wu)色(se)或(huo)很(hen)淺(qian)的(de)顏(yan)色，已經變藍(lan)的(de)底(di)物液不(bu)能(neng)使(shi)用(yong)。

5. 避(bi)免試(shi)劑(ji)和標(biao)本(ben)的(de)交(jiao)叉(cha)汙(wu)染(ran)以免造成錯誤結(jie)果。

6. 在(zai)儲(chu)存和(he)溫(wen)育(yu)時(shi)避免強光直(zhi)接照射(she)。

7. 平(ping)衡(heng)至(zhi)室(shi)溫(wen)後(hou)再(zai)打開(kai)密(mi)封(feng)袋以(yi)防水(shui)滴(di)凝(ning)聚在(zai)冷(leng)板(ban)條(tiao)上(shang)。

8. 任(ren)何(he)反(fan)應(ying)試劑(ji)不(bu)能(neng)接觸漂(piao)白(bai)溶劑(ji)或漂(piao)白(bai)溶劑(ji)所散發的(de)強烈(lie)氣(qi)體(ti)。任(ren)何(he)漂(piao)白(bai)成分(fen)都會破壞試(shi)劑(ji)盒中(zhong)反應(ying)試劑(ji)的(de)生(sheng)物活(huo)性。

9. 不(bu)能(neng)使(shi)用(yong)過期產(chan)品。

10. 如(ru)果可(ke)能(neng)傳播疾(ji)病(bing)，所有(you)的(de)樣(yang)品都應(ying)管(guan)理(li)好，按照(zhao)規定的(de)程(cheng)序(xu)處(chu)理(li)樣(yang)品和(he)檢(jian)測裝置。

試(shi)劑(ji)準備(bei)

試(shi)劑(ji)盒從(cong)冷(leng)藏(zang)環境中取(qu)出應(ying)在(zai)室(shi)溫(wen)平(ping)衡後(hou)方可使用(yong)。

20×洗(xi)滌(di)緩(huan)沖液的(de)稀(xi)釋(shi)：蒸餾(liu)水(shui)按1：20稀(xi)釋(shi)，即(ji)1份20×洗(xi)滌(di)緩(huan)沖液加(jia)19份蒸(zheng)餾(liu)水(shui)。

操(cao)作(zuo)步驟(zhou)

1.  從(cong)室(shi)溫(wen)平(ping)衡20min後(hou)的(de)鋁(lv)箔(bo)袋(dai)中(zhong)取(qu)出所需板(ban)條(tiao)，剩余板(ban)條(tiao)用(yong)自封(feng)袋密(mi)封(feng)放回4℃。

2.  設(she)置(zhi)標(biao)準(zhun)品孔(kong)和(he)樣(yang)本(ben)孔(kong)，標(biao)準(zhun)品孔(kong)各(ge)加(jia)不(bu)同(tong)濃度的(de)標(biao)準(zhun)品50μL；

3.  樣(yang)本(ben)孔(kong)中(zhong)加(jia)入待測(ce)樣(yang)本(ben)50μL；空(kong)白(bai)孔(kong)不(bu)加。

4.  除空白(bai)孔(kong)外(wai)，標(biao)準(zhun)品孔(kong)和(he)樣(yang)本(ben)孔(kong)中(zhong)每(mei)孔(kong)加(jia)入辣(la)根過(guo)氧化(hua)物酶（HRP）標(biao)記(ji)的(de)檢(jian)測(ce)抗體(ti)100μL，用(yong)封(feng)板(ban)膜(mo)封(feng)住反(fan)應(ying)孔(kong)，37℃水(shui)浴(yu)鍋(guo)或恒溫(wen)箱(xiang)溫(wen)育(yu)60min。

5.  棄去(qu)液體(ti)，吸水紙(zhi)上(shang)拍幹(gan)，每(mei)孔(kong)加(jia)滿(man)洗滌(di)液（350μL），靜(jing)置(zhi)1min，甩(shuai)去(qu)洗(xi)滌液，吸水紙(zhi)上(shang)拍幹(gan)，如此重(zhong)復洗(xi)板(ban)5次(ci)（也(ye)可(ke)用(yong)洗板(ban)機洗板(ban)）。

6.  每(mei)孔(kong)加(jia)入底物A、B各(ge)50μL，37℃避(bi)光(guang)孵育(yu)15min。

7.  每(mei)孔(kong)加(jia)入終止(zhi)液50μL，15min內，在(zai)450nm波長處(chu)測(ce)定各孔(kong)的(de)OD值(zhi)。

實(shi)驗(yan)結(jie)果計算

以(yi)所測標(biao)準(zhun)品的(de)OD值(zhi)為(wei)橫(heng)坐標(biao)，標(biao)準(zhun)品的(de)濃(nong)度值(zhi)為(wei)縱坐標(biao)，在(zai)坐標(biao)紙(zhi)上(shang)或(huo)用(yong)相關軟件(jian)繪制(zhi)標(biao)準(zhun)曲(qu)線(xian)，並(bing)得(de)到(dao)直(zhi)線(xian)回歸(gui)方程，將(jiang)樣(yang)品的(de)OD值(zhi)代(dai)入方程，計算出樣(yang)品的(de)濃(nong)度。

試(shi)劑(ji)盒性能(neng)

1.  檢(jian)測(ce)範(fan)圍(wei)：6.25 ng/mL – 200 ng/mL。

2.  靈(ling)敏(min)度：檢測濃度小於(yu)1.0 ng/mL。

3.  特(te)異(yi)性：不(bu)與其它(ta)可(ke)溶性結(jie)構類(lei)似物交叉反應(ying)。

4.  重(zhong)復性：板(ban)內變異(yi)系數(shu)小(xiao)於(yu)10% ，板(ban)間(jian)變(bian)異(yi)系數(shu)小(xiao)於(yu)15% 。

說明

由(you)於(yu)現(xian)有(you)條件(jian)及(ji)科(ke)學(xue)技(ji)術水平尚(shang)不(bu)能(neng)對(dui)所有(you)供(gong)貨(huo)商提(ti)供(gong)的(de)所有(you)原料(liao)進(jin)行(xing)全(quan)面(mian)的(de)鑒(jian)定與分析，本產(chan)品可(ke)能(neng)存(cun)在(zai)壹(yi)定的(de)質(zhi)量(liang)技(ji)術風險。

1. 最終的(de)實(shi)驗(yan)結(jie)果與試劑(ji)的(de)有(you)效(xiao)性、實(shi)驗(yan)者的(de)相(xiang)關操作(zuo)以及(ji)當(dang)時(shi)的(de)實(shi)驗(yan)環境密切(qie)相(xiang)關，請(qing)務必準(zhun)備充足的(de)標(biao)本(ben)備(bei)份。

2. 不(bu)同(tong)批次(ci)的(de)同(tong)壹產(chan)品可(ke)能(neng)會(hui)有(you)少許(xu)差(cha)別(bie)，如(ru)：檢測限、靈敏(min)度以及(ji)顯色(se)時(shi)間(jian)等，請(qing)依據(ju)試(shi)劑(ji)盒內說明書(shu)進(jin)行(xing)實(shi)驗(yan)操(cao)作，網站(zhan)電(dian)子(zi)版(ban)說明書(shu)僅(jin)作(zuo)參(can)考。

3. 只(zhi)有(you)全部(bu)使(shi)用(yong)本試(shi)劑(ji)盒配(pei)套試劑(ji)才(cai)能(neng)保(bao)證(zheng)檢測(ce)效(xiao)果，不(bu)能(neng)混(hun)用(yong)其他制(zhi)造商(shang)的(de)產(chan)品。只(zhi)有(you)嚴格(ge)遵守本(ben)試(shi)劑(ji)盒的(de)實(shi)驗(yan)說明才(cai)會得(de)到最佳的(de)檢(jian)測(ce)結(jie)果。

4. 本(ben)公(gong)司只對(dui)試劑(ji)盒本(ben)身負責，不(bu)對(dui)因(yin)使用(yong)該試(shi)劑(ji)盒所造成的(de)樣(yang)本(ben)消耗(hao)負(fu)責(ze)，請(qing)使用(yong)者使(shi)用(yong)前充分(fen)考(kao)慮(lv)到(dao)樣(yang)本(ben)的(de)可(ke)能(neng)使(shi)用(yong)量(liang)，預留(liu)充足的(de)樣(yang)本(ben)。

5. 使(shi)用(yong)化學(xue)裂解(jie)液制(zhi)備的(de)組織勻(yun)漿或(huo)細(xi)胞(bao)提取(qu)液可(ke)能(neng)會(hui)由(you)於(yu)某(mou)些化(hua)學(xue)物質的(de)引(yin)入導致(zhi)ELISA實(shi)驗(yan)結(jie)果偏(pian)差。

6. 若(ruo)樣(yang)本(ben)為細胞(bao)培養上(shang)清(qing)，因(yin)該類(lei)樣(yang)本(ben)幹擾因(yin)素較多，如(ru)：細胞(bao)狀(zhuang)態(tai)、細胞(bao)數(shu)量(liang)、采樣(yang)時(shi)間(jian)等，所以可(ke)能(neng)存(cun)在(zai)檢(jian)測(ce)不(bu)出的(de)情況。

7. 某(mou)些天(tian)然(ran)蛋白(bai)或(huo)重(zhong)組蛋白(bai)，包括(kuo)原(yuan)核(he)及(ji)真(zhen)核(he)重(zhong)組蛋白(bai)，可(ke)能(neng)因(yin)為與本產(chan)品所使用(yong)的(de)檢(jian)測(ce)抗體(ti)及(ji)捕(bu)獲抗體(ti)不(bu)匹配，而不(bu)被(bei)檢測出。