線(xian)粒(li)體呼(hu)吸鏈(lian)復(fu)合(he)體Ⅳ活(huo)性測試(shi)盒操(cao)作(zuo)程序

線(xian)粒(li)體呼(hu)吸鏈(lian)復(fu)合(he)體Ⅳ活(huo)性測試(shi)盒操(cao)作(zuo)程序
測定意(yi)義：線(xian)粒(li)體復(fu)合(he)體Ⅳ又(you)稱(cheng)細胞色(se)素C氧化酶，也是線(xian)粒(li)體呼(hu)吸電(dian)子傳遞(di)鏈(lian)主(zhu)路和(he)支(zhi)路的(de)共有(you)成分(fen)，負責(ze)催(cui)化還原(yuan)型細胞色(se)素C的氧化，並最終把電(dian)子傳遞(di)給(gei)氧，生(sheng)成(cheng)水(shui)。

測定原(yuan)理：還原(yuan)型細胞色(se)素C在550nm有(you)特(te)征光吸收(shou)，線(xian)粒(li)體復(fu)合(he)體Ⅳ催(cui)化還原(yuan)型細胞色(se)素C生(sheng)成(cheng)氧(yang)化型細胞色(se)素C，因此550nm光吸收(shou)下(xia)降(jiang)速(su)率能(neng)夠反映線(xian)粒(li)體復(fu)合(he)體Ⅳ酶(mei)活性。

需(xu)要(yao)的(de)儀器，耗(hao)材(cai):可(ke)見(jian)分光光度計/酶(mei)標儀、臺(tai)式離心機、水浴(yu)鍋、可(ke)調式移液器、微量石(shi)英(ying)比色(se)皿/96孔板、研缽、冰和(he)蒸(zheng)餾(liu)水(shui)。

樣本(ben)處理
1. 稱(cheng)取(qu)約 0.1g 組織(zhi)或(huo)收(shou)集 500 萬細胞，加(jia)入(ru) 1.0 mL 提(ti)取(qu)液，用(yong)冰浴勻(yun)漿(jiang)器或(huo)研缽勻(yun)漿(jiang)。4 ℃ 600g 離心 10min。

2. 將(jiang)上(shang)清(qing)液移至另壹(yi)離心管(guan)中，4 ℃ 11000g 離心 15min。

3. 上(shang)清(qing)液即(ji)胞漿(jiang)提(ti)取(qu)物(wu)，可(ke)用(yong)於測定從(cong)線(xian)粒(li)體泄漏(lou)的復(fu)合(he)體Ⅳ（此(ci)步(bu)可(ke)選做(zuo)，可(ke)以(yi)判(pan)斷(duan)線(xian)粒(li)體提(ti)取(qu)效果(guo)）。

4. 在沈(chen)澱中加(jia)入(ru) 400uL 提(ti)取(qu)液，超(chao)聲波破碎（功率 20%，超(chao)聲 5 秒，間(jian)隔(ge) 10 秒，重(zhong)復(fu) 15 次(ci)），用(yong)於復(fu)合(he)體Ⅳ 酶(mei)活性測定，並且用(yong)於蛋白含(han)量測定。