小鼠(shu)酮體ELISA試劑盒操作(zuo)步驟(zhou)

小(xiao)鼠(shu)酮體ELISA試劑盒操作(zuo)步驟(zhou)

有效(xiao)期：6個月

保(bao)存條件(jian)：2-8℃

樣本處(chu)理及要(yao)求

1.  血清：將(jiang)收集於血清分(fen)離(li)管的(de)全(quan)血標本在室(shi)溫放(fang)置(zhi)2小時或4℃過夜(ye)，然後1000×g離心20 分(fen)鐘，取(qu)上清(qing)即可(ke)，或將(jiang)上清(qing)置(zhi)於-20℃或-80℃保(bao)存，但(dan)應避(bi)免反復(fu)凍融。
2.  血漿：用(yong)EDTA或肝素作(zuo)為(wei)抗(kang)凝(ning)劑采集標本(ben)，並(bing)將(jiang)標本(ben)在采集後的(de)30分(fen)鐘內於(yu)2-8℃ 1000×g離心15分(fen)鐘，取(qu)上清(qing)即可(ke)檢測，或將(jiang)上清(qing)置(zhi)於-20℃或-80℃保(bao)存，但(dan)應避(bi)免反復(fu)凍融。
3.  組織勻(yun)漿：用(yong)預冷(leng)的(de)PBS (0.01M, pH=7.4)沖(chong)洗組織，去(qu)除殘(can)留血液（勻漿中(zhong)裂解的(de)紅(hong)細(xi)胞會(hui)影響(xiang)測量(liang)結(jie)果(guo)），稱重後將(jiang)組織剪碎。將(jiang)剪碎的(de)組織與(yu)對(dui)應體積的(de)PBS（壹般(ban)按(an)1:9的(de)重量體積比，比如1g的(de)組織樣(yang)品對(dui)應9mL的(de)PBS，具體體積可(ke)根據實(shi)驗(yan)需(xu)要(yao)適當(dang)調(tiao)整，並(bing)做(zuo)好(hao)記錄。推薦(jian)在PBS中(zhong)加(jia)入(ru)蛋白酶抑制劑）加(jia)入(ru)玻(bo)璃(li)勻(yun)漿(jiang)器(qi)中(zhong)，於冰(bing)上(shang)充分(fen)研(yan)磨(mo)。為(wei)了進壹步裂解組織細(xi)胞，可(ke)以對(dui)勻漿液進行超聲破碎，或反復(fu)凍融。*後將(jiang)勻漿(jiang)液(ye)於(yu)5000×g離心5~10分(fen)鐘，取(qu)上清(qing)檢(jian)測。

4.  細(xi)胞培(pei)養(yang)物上(shang)清(qing)或其它(ta)生物標(biao)本(ben)：請1000×g離心20分(fen)鐘，取(qu)上清(qing)即可(ke)檢測，或將(jiang)上清(qing)置(zhi)於-20℃或-80℃保(bao)存，但(dan)應避(bi)免反復(fu)凍融。

需(xu)要(yao)而(er)未提供的(de)試劑和器材(cai)

1. 酶標儀（450nm）

2. 高精(jing)度(du)加(jia)樣器及(ji)槍頭(tou)：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

4. 蒸(zheng)餾(liu)水或去(qu)離(li)子(zi)水

實驗(yan)結(jie)果(guo)計算

以所測標(biao)準(zhun)品的(de)OD值為(wei)橫(heng)坐(zuo)標(biao)，標準(zhun)品的(de)濃度值(zhi)為(wei)縱(zong)坐標(biao)，在坐標紙上或用(yong)相關軟(ruan)件(jian)繪制標準(zhun)曲線(xian)，並(bing)得(de)到直線(xian)回(hui)歸(gui)方程，將(jiang)樣品(pin)的(de)OD值代(dai)入(ru)方(fang)程(cheng)，計(ji)算出(chu)樣品的(de)濃度。

1. 試劑盒從(cong)冷藏(zang)環(huan)境中(zhong)取(qu)出(chu)應在室(shi)溫平(ping)衡15-30 分(fen)鐘後方(fang)可(ke)使用(yong)，酶標包被板(ban)開封後(hou)如未用(yong)完，板(ban)條應裝(zhuang)入(ru)密(mi)封(feng)袋(dai)中(zhong)保(bao)存。

2. 濃洗滌液可(ke)能會有(you)結(jie)晶析(xi)出(chu)，稀(xi)釋(shi)時(shi)可(ke)在水浴中(zhong)加(jia)溫助溶(rong)，洗滌時不影(ying)響(xiang)結(jie)果(guo)。

3. 各步加(jia)樣均應使(shi)用(yong)加(jia)樣器，並(bing)經(jing)常(chang)校對(dui)其準(zhun)確性，以避免試驗(yan)誤(wu)差(cha)。壹次(ci)加(jia)樣時間(jian)控制在5 分(fen)鐘內，如標本(ben)數量(liang)多，推薦(jian)使用(yong)排(pai)槍加(jia)樣。

4. 請每(mei)次(ci)測定的(de)同時(shi)做(zuo)標(biao)準(zhun)曲線(xian)，建(jian)議做復(fu)孔。如標本(ben)中(zhong)待測物質含(han)量過(guo)高（樣(yang)本(ben)OD 值大於標(biao)準(zhun)品孔di壹孔的(de)OD 值），請先(xian)用(yong)樣品稀(xi)釋(shi)液(ye)稀(xi)釋(shi)壹定倍(bei)數（n 倍(bei)）後(hou)再(zai)測定，計(ji)算時請z後(hou)乘以總稀(xi)釋(shi)倍(bei)數（×n×5）。

5. 封(feng)板(ban)膜只限壹次(ci)性使用(yong)，以避免交叉(cha)汙染(ran)。

6. 底物請避(bi)光(guang)保(bao)存。

7. 嚴格按(an)照說(shuo)明(ming)書(shu)的(de)操作(zuo)進行，試驗(yan)結(jie)果(guo)判定必(bi)須以酶標儀讀(du)數為(wei)準(zhun).

8. 所有(you)樣(yang)品，洗滌液和各種廢(fei)棄物都(dou)應(ying)按(an)傳(chuan)染(ran)物處(chu)理。

9. 本試劑不同批(pi)號組分(fen)不(bu)得混用(yong)。

10. 試劑盒2-8℃冷藏，保(bao)質期6個月