牛(niu)免(mian)疫球蛋(dan)白AELISA試(shi)劑(ji)盒(he)操作(zuo)步驟

牛(niu)免(mian)疫球蛋(dan)白AELISA試(shi)劑(ji)盒(he)操作(zuo)步驟

ELISA試劑(ji)盒(he)
標(biao)本：血(xue)清(qing)、血(xue)漿、細(xi)胞(bao)上(shang)清(qing)液、尿(niao)液、體(ti)液、灌洗(xi)液、腦脊髓(sui)、心(xin)房(fang)水(shui)、胸(xiong)房水(shui)、組(zu)織等。
種(zhong)屬(shu)：人(ren)、大(da)鼠、小(xiao)鼠(shu)、兔(tu)子(zi)、豬、犬(quan)、猴、馬、牛(niu)、羊(yang)、雞(ji)、鴨、魚(yu)等。
用(yong)途：科研實(shi)驗等(deng)領域科學研究，不得用於(yu)臨(lin)床(chuang)診斷.
特(te)點：靈敏(min)性(xing)高、特(te)異性(xing)強、重(zhong)復性(xing)好.
 

試(shi)劑(ji)盒(he)組(zu)成(cheng)及(ji)試劑(ji)配制(zhi) 
1. 酶(mei)聯(lian)板（Assay plate ）：壹(yi)塊（96孔(kong)）。 
2. 標(biao)準(zhun)品（Standard）：6瓶。
3. 生(sheng)物素標記(ji)抗體稀釋液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
4. 辣根過(guo)氧化(hua)物酶(mei)標(biao)記(ji)親(qin)和(he)素(su)稀釋液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
5. 生(sheng)物素標記(ji)抗體（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）
7. 辣根過(guo)氧化(hua)物酶(mei)標(biao)記(ji)親(qin)和(he)素(su)（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）
6. 底(di)物溶液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。 
7. 濃(nong)洗(xi)滌(di)液（Wash Buffer）：1×30ml/瓶，使用時(shi)每瓶用(yong)蒸(zheng)餾水(shui)稀釋25倍(bei)。 
8. 終(zhong)止(zhi)液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）

實(shi)驗原(yuan)理(li)
用純化的抗體包(bao)被微孔板，制(zhi)成(cheng)固(gu)相(xiang)載(zai)體(ti)，往(wang)包(bao)被抗C3抗體的微孔中(zhong)依次加(jia)入(ru)標(biao)本或(huo)標(biao)準(zhun)品、生(sheng)物素化的抗C3抗體、HRP標(biao)記的親(qin)和(he)素(su)，經過*洗(xi)滌(di)後(hou)用底(di)物TMB顯色(se)。TMB在(zai)過(guo)氧化(hua)物酶(mei)的催化下轉化(hua)成(cheng)藍色(se)，並(bing)在(zai)酸的作(zuo)用(yong)下(xia)轉化(hua)成(cheng)z終(zhong)的黃(huang)色(se)。顏色(se)的深淺(qian)和(he)樣(yang)品中(zhong)的C3呈(cheng)正相(xiang)關(guan)。用酶(mei)標(biao)儀(yi)在(zai)450nm波(bo)長下(xia)測定(ding)吸光度(OD值(zhi))，計算樣(yang)品濃(nong)度(du)。
標(biao)本的采集及(ji)保(bao)存(cun)
1. 血(xue)清(qing)：全(quan)血(xue)標本請於(yu)室(shi)溫(wen)放置(zhi)2小時(shi)或(huo)4℃過(guo)夜後(hou)於(yu)1000 x g離(li)心(xin)20分鐘，取(qu)上清(qing)即(ji)可(ke)檢(jian)測，或(huo)將標本放於(yu)-20℃或(huo)-80℃保(bao)存(cun)，但應(ying)避(bi)免(mian)反(fan)復凍融(rong)。
2. 血(xue)漿：可(ke)用(yong)EDTA或(huo)肝素作(zuo)為(wei)抗凝劑(ji)，標(biao)本采集後(hou)30分鐘內於(yu)2 - 8° C 1000 x g離(li)心(xin)15分鐘，或(huo)將標本放於(yu)-20℃或(huo)-80℃保(bao)存(cun)，但應(ying)避(bi)免(mian)反(fan)復凍融(rong)。
3. 細(xi)胞(bao)培(pei)養物上清(qing)或(huo)其(qi)它(ta)生物標本：請1000 x g離(li)心20分鐘，取(qu)上清(qing)即(ji)可(ke)檢(jian)測，或(huo)將標本放於(yu)-20℃或(huo)-80℃保(bao)存(cun)，但應(ying)避(bi)免(mian)反(fan)復凍融(rong)。
4. 樣(yang)本處理(li)：血(xue)清(qing)或(huo)血(xue)漿標本推薦(jian)稀釋10,000倍(bei)。
 

ELISA試劑(ji)盒(he)操作(zuo)註意(yi)事(shi)項(xiang)：
1）試劑(ji)應(ying)按(an)標(biao)簽說明(ming)書(shu)儲(chu)存(cun)，使用前(qian)恢復到室溫(wen)。稀稀過(guo)後(hou)的標(biao)準(zhun)品應(ying)丟(diu)棄，不可(ke)保(bao)存(cun)。
2）實(shi)驗中(zhong)不用的板條(tiao)應(ying)立即(ji)放回(hui)包裝袋(dai)中(zhong)，密(mi)封保(bao)存(cun)，以(yi)免(mian)變(bian)質(zhi)。
3）不用的其(qi)它(ta)試劑(ji)應(ying)包裝好或(huo)蓋好。不同(tong)批號的試(shi)劑(ji)不要(yao)混(hun)用。保(bao)質(zhi)前使用。
4）使用壹(yi)次性(xing)的吸頭(tou)以(yi)免(mian)交(jiao)叉汙染，吸取(qu)終(zhong)止(zhi)液和(he)底(di)物A、B液時(shi)，避(bi)免(mian)使用帶(dai)金(jin)屬部分的加(jia)樣(yang)器(qi)。
5）使用幹凈(jing)的塑(su)料容(rong)器(qi)配置(zhi)洗滌(di)液。使用前(qian)充(chong)分混勻試劑(ji)盒(he)裏(li)的各(ge)種成(cheng)份(fen)及(ji)樣品。
6）洗(xi)滌(di)酶(mei)標(biao)板時(shi)應(ying)充(chong)分拍幹，不要(yao)將吸水(shui)紙直(zhi)接放入(ru)酶(mei)標(biao)反(fan)應(ying)孔中(zhong)吸水(shui)。
7）底(di)物A應(ying)揮發，避(bi)免(mian)長(chang)時(shi)間(jian)打(da)開(kai)蓋子。底(di)物B對(dui)光敏感(gan)，避(bi)免(mian)長(chang)時(shi)間(jian)暴(bao)露於(yu)光下。避(bi)免(mian)用(yong)手(shou)接觸，有(you)毒(du)。實(shi)驗完成(cheng)後(hou)應(ying)立即(ji)讀取(qu)OD值。
8）加(jia)入(ru)試(shi)劑(ji)的順(shun)序應(ying)壹(yi)致(zhi)，以(yi)保(bao)證(zheng)所有(you)反(fan)應(ying)板孔溫(wen)育的時(shi)間(jian)壹(yi)樣(yang)。
9）按(an)照(zhao)說明(ming)書(shu)中(zhong)標(biao)明的時(shi)間(jian)、加(jia)液的量(liang)及(ji)順序進(jin)行(xing)溫(wen)育操作(zuo)