植(zhi)物超氧化物歧(qi)化酶(mei)ELISA試(shi)劑盒實(shi)驗原理

植物超氧化物歧(qi)化酶(mei)ELISA試(shi)劑盒實(shi)驗原理

ELISA試(shi)劑(ji)盒
標(biao)本：血清(qing)、血漿(jiang)、細(xi)胞上(shang)清(qing)液、尿(niao)液、體(ti)液、灌洗液、腦(nao)脊(ji)髓(sui)、心(xin)房水、胸房水、組(zu)織等(deng)。
種屬：人(ren)、大(da)鼠(shu)、小(xiao)鼠(shu)、兔(tu)子(zi)、豬、犬(quan)、猴(hou)、馬(ma)、牛、羊、雞(ji)、鴨(ya)、魚等(deng)。
用(yong)途(tu)：科(ke)研實(shi)驗等(deng)領域(yu)科(ke)學研究，不(bu)得用(yong)於臨(lin)床診(zhen)斷(duan).
特點(dian)：靈(ling)敏性高、特異(yi)性強、重復(fu)性好(hao).
 

試劑盒組(zu)成及試(shi)劑配(pei)制 
1. 酶(mei)聯板(ban)（Assay plate ）：壹塊(kuai)（96孔(kong)）。 
2. 標準品(pin)（Standard）：6瓶。
3. 生(sheng)物素標(biao)記(ji)抗(kang)體(ti)稀釋(shi)液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
4. 辣(la)根過(guo)氧化物酶標(biao)記(ji)親(qin)和(he)素稀釋(shi)液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
5. 生(sheng)物素標(biao)記(ji)抗(kang)體(ti)（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）
7. 辣(la)根過(guo)氧化物酶標(biao)記(ji)親(qin)和(he)素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）
6. 底(di)物溶(rong)液(ye)（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。 
7. 濃洗滌液（Wash Buffer）：1×30ml/瓶，使用(yong)時每(mei)瓶用(yong)蒸餾(liu)水稀(xi)釋25倍(bei)。 
8. 終(zhong)止(zhi)液(ye)（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）

實(shi)驗原理
用(yong)純化的(de)抗(kang)體(ti)包被微(wei)孔(kong)板，制成固相載(zai)體(ti)，往包(bao)被抗(kang)C3抗(kang)體(ti)的微(wei)孔(kong)中依(yi)次(ci)加(jia)入標(biao)本或標(biao)準品(pin)、生(sheng)物素化的(de)抗(kang)C3抗(kang)體(ti)、HRP標記(ji)的親(qin)和(he)素，經過(guo)*洗(xi)滌後用(yong)底(di)物TMB顯色(se)。TMB在(zai)過(guo)氧化物酶的(de)催(cui)化下(xia)轉(zhuan)化成藍色(se)，並(bing)在(zai)酸(suan)的(de)作(zuo)用(yong)下(xia)轉(zhuan)化成黃色(se)。顏(yan)色(se)的(de)深(shen)淺和(he)樣品(pin)中(zhong)的(de)C3呈(cheng)正(zheng)相關。用(yong)酶標(biao)儀(yi)在450nm波(bo)長下(xia)測(ce)定(ding)吸光(guang)度(du)(OD值(zhi))，計(ji)算樣品(pin)濃度(du)。
標(biao)本的采(cai)集(ji)及保(bao)存(cun)
1. 血(xue)清(qing)：全(quan)血標本請(qing)於(yu)室(shi)溫放(fang)置(zhi)2小(xiao)時(shi)或(huo)4℃過(guo)夜(ye)後於1000 x g離心(xin)20分鐘，取上(shang)清(qing)即可檢測，或(huo)將標本放(fang)於(yu)-20℃或(huo)-80℃保(bao)存(cun)，但(dan)應(ying)避(bi)免(mian)反復(fu)凍(dong)融。
2. 血漿(jiang)：可(ke)用(yong)EDTA或肝(gan)素作為(wei)抗(kang)凝(ning)劑，標(biao)本采集(ji)後30分鐘內於2 - 8° C 1000 x g離心(xin)15分鐘，或將標本放(fang)於(yu)-20℃或(huo)-80℃保(bao)存(cun)，但(dan)應(ying)避(bi)免(mian)反復(fu)凍(dong)融。
3. 細胞培(pei)養(yang)物上清(qing)或(huo)其(qi)它(ta)生物標本：請(qing)1000 x g離心(xin)20分鐘，取上(shang)清(qing)即可檢測，或(huo)將標本放(fang)於(yu)-20℃或(huo)-80℃保(bao)存(cun)，但(dan)應(ying)避(bi)免(mian)反復(fu)凍(dong)融。
4. 樣本處理：血(xue)清(qing)或(huo)血漿(jiang)標(biao)本推薦(jian)稀釋(shi)10,000倍(bei)。
 

ELISA試(shi)劑(ji)盒操作註意事項(xiang)：
1）試劑應(ying)按標(biao)簽(qian)說(shuo)明書儲存(cun)，使用(yong)前恢(hui)復(fu)到室溫。稀(xi)稀(xi)過(guo)後(hou)的標準品(pin)應(ying)丟棄(qi)，不(bu)可(ke)保(bao)存(cun)。
2）實(shi)驗中不(bu)用(yong)的板(ban)條應(ying)立即放(fang)回(hui)包(bao)裝(zhuang)袋中(zhong)，密封(feng)保存(cun)，以(yi)免(mian)變(bian)質(zhi)。
3）不(bu)用(yong)的其(qi)它試劑應(ying)包裝(zhuang)好(hao)或蓋好(hao)。不(bu)同(tong)批(pi)號的試(shi)劑(ji)不(bu)要(yao)混用(yong)。保質(zhi)前使用(yong)。
4）使用(yong)壹次(ci)性的吸頭(tou)以(yi)免交(jiao)叉(cha)汙染(ran)，吸取(qu)終(zhong)止液(ye)和底(di)物A、B液時(shi)，避(bi)免(mian)使用(yong)帶(dai)金(jin)屬部分的加(jia)樣器。
5）使用(yong)幹凈(jing)的塑(su)料(liao)容(rong)器配置(zhi)洗(xi)滌液。使用(yong)前充分混勻(yun)試(shi)劑(ji)盒裏(li)的(de)各(ge)種(zhong)成份(fen)及樣品(pin)。
6）洗(xi)滌(di)酶(mei)標(biao)板時(shi)應(ying)充分拍幹(gan)，不(bu)要(yao)將吸水紙(zhi)直接(jie)放(fang)入(ru)酶(mei)標(biao)反應(ying)孔(kong)中吸水。
7）底(di)物A應(ying)揮發(fa)，避(bi)免(mian)長時(shi)間(jian)打開(kai)蓋子。底(di)物B對(dui)光(guang)敏感，避(bi)免(mian)長時(shi)間(jian)暴露(lu)於(yu)光下(xia)。避(bi)免(mian)用(yong)手接(jie)觸(chu)，有(you)毒。實(shi)驗完成後應(ying)立即讀取(qu)OD值(zhi)。
8）加(jia)入試(shi)劑的(de)順序應(ying)壹致(zhi)，以(yi)保(bao)證(zheng)所有反應(ying)板孔(kong)溫育(yu)的(de)時(shi)間(jian)壹(yi)樣。
9）按(an)照說(shuo)明書中標明的時間、加(jia)液的(de)量(liang)及順(shun)序進行溫育(yu)操作

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