人(ren)溶(rong)血(xue)磷脂酸ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)實驗(yan)操作步(bu)驟

Elisa試(shi)劑(ji)盒(he) 性(xing)能:

 1．準確性(xing)：標準品線(xian)性(xing)回歸與預期(qi)濃度相(xiang)關系數(shu)R值(zhi)，大於等(deng)於0.9900。

 2．靈(ling)敏度：低(di)檢(jian)測(ce)濃度小於10 pg/ml。

 3．特異性(xing)：不(bu)與(yu)其它可(ke)溶(rong)性(xing)結構(gou)類(lei)似物(wu)交(jiao)叉(cha)反(fan)應(ying)。

 4．重復性(xing)：板內(nei)、板間(jian)變異系數(shu)均小於15%。

 貯藏(zang)：2-8℃，避光(guang)防(fang)潮保(bao)存(cun)。

 有(you)效期(qi)：6個(ge)月

樣(yang)本(ben)處理(li)及要(yao)求

1.  血(xue)清：將收集(ji)於血(xue)清分(fen)離(li)管(guan)的全血標本(ben)在室(shi)溫(wen)放(fang)置(zhi)2小時或4℃過夜，然(ran)後(hou)1000×g離(li)心(xin)20 分(fen)鐘(zhong)，取(qu)上(shang)清即(ji)可，或將上清置(zhi)於-20℃或(huo)-80℃保存(cun)，但(dan)應(ying)避免反(fan)復凍融。
2.  血(xue)漿：用(yong)EDTA或(huo)肝(gan)素作為(wei)抗凝劑采集(ji)標本(ben)，並(bing)將標本(ben)在采集(ji)後(hou)的(de)30分(fen)鐘(zhong)內(nei)於2-8℃ 1000×g離(li)心(xin)15分(fen)鐘(zhong)，取(qu)上(shang)清即(ji)可檢(jian)測(ce)，或將上清置(zhi)於-20℃或(huo)-80℃保存(cun)，但(dan)應(ying)避免反(fan)復凍融。
3.  組(zu)織(zhi)勻(yun)漿：用(yong)預(yu)冷(leng)的(de)PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗(xi)組(zu)織(zhi)，去(qu)除殘(can)留(liu)血(xue)液(ye)（勻漿中裂(lie)解的紅細(xi)胞(bao)會(hui)影(ying)響測(ce)量(liang)結(jie)果(guo)），稱(cheng)重後(hou)將組(zu)織(zhi)剪(jian)碎。將剪碎的組(zu)織(zhi)與(yu)對(dui)應(ying)體積(ji)的PBS（壹般按(an)1:9的(de)重量(liang)體(ti)積(ji)比，比如(ru)1g的(de)組(zu)織(zhi)樣(yang)品對(dui)應(ying)9mL的PBS，具體(ti)體積(ji)可根(gen)據(ju)實驗(yan)需要(yao)適(shi)當調(tiao)整(zheng)，並(bing)做(zuo)好(hao)記(ji)錄(lu)。推(tui)薦在PBS中加入(ru)蛋白酶抑(yi)制(zhi)劑）加入(ru)玻璃(li)勻(yun)漿器中，於冰(bing)上(shang)充(chong)分(fen)研(yan)磨(mo)。為(wei)了(le)進壹步(bu)裂(lie)解組(zu)織(zhi)細(xi)胞(bao)，可以(yi)對(dui)勻漿液(ye)進行(xing)超(chao)聲(sheng)破(po)碎，或反(fan)復凍融。後(hou)將勻漿液(ye)於5000×g離(li)心(xin)5~10分(fen)鐘(zhong)，取(qu)上(shang)清檢(jian)測(ce)。

4.  細(xi)胞(bao)培養(yang)物(wu)上(shang)清或其它生(sheng)物(wu)標(biao)本(ben)：請(qing)1000×g離(li)心(xin)20分(fen)鐘(zhong)，取(qu)上(shang)清即(ji)可檢(jian)測(ce)，或將上清置(zhi)於-20℃或(huo)-80℃保存(cun)，但(dan)應(ying)避免反(fan)復凍融。

註(zhu)：標本(ben)溶(rong)血(xue)會(hui)影(ying)響後(hou)檢(jian)測(ce)結果(guo)，因(yin)此溶(rong)血(xue)標(biao)本(ben)不(bu)宜進行(xing)此(ci)項檢(jian)測(ce)。

【樣(yang)本(ben)收集(ji)保存(cun)】

　　1、血(xue)清：使用(yong)不(bu)含熱原(yuan)和內毒素的試(shi)管(guan)，操作過程(cheng)中避(bi)免任(ren)何細(xi)胞(bao)刺(ci)激(ji)，收集(ji)血液(ye)後(hou)，3000轉(zhuan)離(li)心(xin)10分(fen)鐘(zhong)將血清和紅細(xi)胞(bao)迅速(su)小心地(di)分(fen)離(li)。

　　2、血(xue)漿：EDTA、檸(ning)檬酸鹽(yan)或(huo)肝(gan)素抗凝。3000轉(zhuan)離(li)心(xin)30分(fen)鐘(zhong)取(qu)上(shang)清。

　　3、細(xi)胞(bao)上清液(ye)：3000轉(zhuan)離(li)心(xin)10分(fen)鐘(zhong)去(qu)除顆(ke)粒和聚合(he)物(wu)。

　　4、組(zu)織(zhi)勻(yun)漿：將組(zu)織(zhi)加入(ru)適量(liang)生(sheng)理(li)鹽(yan)水(shui)搗(dao)碎。3000轉(zhuan)離(li)心(xin)10分(fen)鐘(zhong)取(qu)上(shang)清。

　　5、保(bao)存(cun)：如(ru)果(guo)樣(yang)本(ben)收集(ji)後(hou)不(bu)及(ji)時檢(jian)測(ce)，請按(an)壹次(ci)用(yong)量(liang)分(fen)裝(zhuang)，凍存(cun)於-20℃，避(bi)免反(fan)復凍融，在室(shi)溫(wen)下(xia)解凍並(bing)確保樣品均勻(yun)地(di)充(chong)分(fen)解凍。