小(xiao)鼠(shu)氧(yang)化低密(mi)度脂(zhi)蛋白(bai)（OxLDL）酶聯免疫(yi)檢測(ce)試劑盒(he)說(shuo)明書(shu)

小(xiao)鼠(shu)氧(yang)化低密(mi)度脂(zhi)蛋白(bai)（OxLDL）試劑盒(he)（ELISA）

使用(yong)說(shuo)明書(shu)

l  本試劑盒(he)用於(yu)體(ti)外定(ding)量(liang)檢測(ce)血(xue)清(qing)、血漿(jiang)、組織(zhi)勻(yun)漿(jiang)及(ji)相(xiang)關(guan)液(ye)體(ti)樣(yang)本中(zhong)小(xiao)鼠(shu)氧(yang)化低密(mi)度脂(zhi)蛋白(bai)（OxLDL）的含量(liang)。

l  有效(xiao)期(qi)：6個月(yue)

l  保存條件：2-8℃

l  本試劑盒(he)僅供(gong)體(ti)外研(yan)究使用，不(bu)用於(yu)臨(lin)床(chuang)診斷(duan)

實驗(yan)原理

試劑盒(he)采用雙(shuang)抗(kang)體(ti)壹(yi)步(bu)夾(jia)心(xin)法(fa)酶聯免疫(yi)吸附試驗（ELISA）。往預先包被小(xiao)鼠(shu)氧(yang)化低密(mi)度脂(zhi)蛋白(bai)（OxLDL）捕(bu)獲(huo)抗體(ti)的包被微(wei)孔(kong)中(zhong)，依(yi)次(ci)加入標本(ben)、標準(zhun)品、HRP標記(ji)的檢測(ce)抗(kang)體(ti)，經(jing)過(guo)溫(wen)育(yu)並*洗滌。用(yong)底(di)物TMB顯色，TMB在(zai)過(guo)氧(yang)化物酶的催化下轉化成(cheng)藍(lan)色，並在(zai)酸的作用下轉化成(cheng)zui終(zhong)的黃色。顏色的深淺和樣(yang)品中(zhong)的小(xiao)鼠(shu)氧(yang)化低密(mi)度脂(zhi)蛋白(bai)（OxLDL）呈(cheng)正相關(guan)。用(yong)酶標儀(yi)在(zai)450nm 波長(chang)下測(ce)定(ding)吸(xi)光度（OD 值(zhi)），計算(suan)樣(yang)品濃(nong)度。
樣(yang)本處(chu)理(li)及(ji)要(yao)求(qiu)

1.  血清(qing)：將收(shou)集於(yu)血清分離管的全血(xue)標本(ben)在(zai)室溫(wen)放(fang)置2小(xiao)時(shi)或(huo)4℃放(fang)壹(yi)夜(ye)，然(ran)後(hou)1000×g離心(xin)20 分鐘(zhong)，取(qu)上(shang)清(qing)即(ji)可，或(huo)將上(shang)清(qing)置於-20℃或(huo)-80℃保存，但應避(bi)免反復(fu)凍融(rong)。
2.  血漿(jiang)：用EDTA或(huo)肝(gan)素(su)作為抗(kang)凝(ning)劑采集標本(ben)，並將標本(ben)在(zai)采集後(hou)的30分鐘(zhong)內於(yu)2-8℃ 1000×g離心(xin)15分鐘(zhong)，取(qu)上(shang)清(qing)即(ji)可檢測(ce)，或(huo)將上(shang)清(qing)置於-20℃或(huo)-80℃保存，但應避(bi)免反復(fu)凍融(rong)。
3.  組織(zhi)勻(yun)漿(jiang)：用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組織(zhi)，去(qu)除殘(can)留血(xue)液(ye)（勻漿(jiang)中(zhong)裂(lie)解(jie)的紅細胞會影(ying)響測(ce)量(liang)結果(guo)），稱(cheng)重後(hou)將組織(zhi)剪(jian)碎。將剪碎的組織(zhi)與(yu)對應體(ti)積的PBS（壹(yi)般(ban)按(an)1:9的重量(liang)體(ti)積比，比如1g的組織(zhi)樣(yang)品對應9mL的PBS，具體(ti)體(ti)積可根據(ju)實驗(yan)需要(yao)適(shi)當調整，並做好記(ji)錄。推薦在(zai)PBS中(zhong)加(jia)入蛋白(bai)酶抑(yi)制(zhi)劑）加(jia)入玻璃(li)勻漿(jiang)器(qi)中(zhong)，於(yu)冰上(shang)充分研(yan)磨。為了(le)進(jin)壹(yi)步(bu)裂(lie)解(jie)組織(zhi)細胞，可以(yi)對勻漿(jiang)液(ye)進行超聲破碎，或(huo)反復(fu)凍融(rong)。zui後(hou)將勻漿(jiang)液(ye)於5000×g離心(xin)5~10分鐘(zhong)，取(qu)上(shang)清(qing)檢測(ce)。

4.  細胞培養(yang)物上(shang)清(qing)或(huo)其它(ta)生(sheng)物標本(ben)：請1000×g離心(xin)20分鐘(zhong)，取(qu)上(shang)清(qing)即(ji)可檢測(ce)，或(huo)將上(shang)清(qing)置於-20℃或(huo)-80℃保存，但應避(bi)免反復(fu)凍融(rong)。

註：標本(ben)溶(rong)血會影(ying)響zui後(hou)檢測(ce)結(jie)果(guo)，因(yin)此(ci)溶血(xue)標本(ben)不(bu)宜(yi)進行此(ci)項檢測(ce)。

需要(yao)而(er)未(wei)提(ti)供(gong)的試劑和器(qi)材(cai)

1. 酶標儀(yi)（450nm）
2. 高精(jing)度加樣(yang)器(qi)及(ji)槍頭(tou)：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒(heng)溫(wen)箱(xiang)
4. 蒸餾(liu)水或(huo)去(qu)離子水

試劑盒(he)組成(cheng)

備註：

1.  標準(zhun)品濃度依(yi)次(ci)為：16、8、4、2、1、0.5 μg/mL

2.  經(jing)過(guo)大量(liang)正常(chang)標本(ben)檢驗(yan)，標本(ben)的正常(chang)濃(nong)度值(zhi)均在(zai)試劑盒(he)提(ti)供(gong)的檢測(ce)範圍內(nei)，實驗(yan)過(guo)程中(zhong)直(zhi)接取(qu)50μL樣(yang)本上(shang)樣(yang)即(ji)可。當有(you)部分樣(yang)本值(zhi)超過(guo)zui大標準(zhun)品濃度時(shi)，可用樣(yang)本稀(xi)釋(shi)液(ye)將標本(ben)進(jin)行適(shi)當稀(xi)釋(shi)後(hou)再(zai)進(jin)行實驗(yan)。

註意(yi)事(shi)項

1. 嚴格(ge)按(an)照規(gui)定(ding)的時(shi)間和溫(wen)度進行溫(wen)育(yu)以(yi)保證準(zhun)確(que)結(jie)果(guo)。所(suo)有(you)試劑都必須(xu)在(zai)使用(yong)前(qian)達到(dao)室溫(wen)20-25℃。使用(yong)後(hou)立(li)即(ji)冷(leng)藏(zang)保存試劑。
2. 洗板不(bu)正確(que)可以(yi)導致(zhi)不(bu)準(zhun)確(que)的結果(guo)。在(zai)加入底(di)物前(qian)確(que)保盡量(liang)吸幹孔內(nei)液(ye)體(ti)。溫(wen)育(yu)過(guo)程中(zhong)不(bu)要(yao)讓(rang)微孔(kong)幹燥掉(diao)。
3. 消(xiao)除(chu)板底(di)殘(can)留的液(ye)體(ti)和手(shou)指(zhi)印(yin)，否(fou)則影(ying)響OD值(zhi)。
4. 底(di)物顯色液(ye)應呈(cheng)無色或(huo)很淺(qian)的顏色，已經(jing)變藍(lan)的底(di)物液(ye)不(bu)能使(shi)用(yong)。
5. 避(bi)免試劑和標本(ben)的交叉汙(wu)染(ran)以(yi)免造(zao)成(cheng)錯(cuo)誤結(jie)果(guo)。
6. 在(zai)儲存和溫(wen)育(yu)時(shi)避(bi)免強(qiang)光(guang)直(zhi)接照射(she)。
7. 平衡至(zhi)室溫(wen)後(hou)再(zai)打(da)開(kai)密(mi)封(feng)袋以(yi)防(fang)水滴凝(ning)聚(ju)在(zai)冷板條上(shang)。
8. 任何(he)反應(ying)試劑不(bu)能接觸漂(piao)白(bai)溶劑或(huo)漂(piao)白(bai)溶劑所(suo)散發(fa)的強(qiang)烈(lie)氣(qi)體(ti)。任何(he)漂(piao)白(bai)成(cheng)分都會破(po)壞試劑盒(he)中(zhong)反應(ying)試劑的生(sheng)物活(huo)性。
9. 不(bu)能使(shi)用(yong)過(guo)期產品(pin)。
10. 如果(guo)可能傳(chuan)播(bo)疾(ji)病(bing)，所(suo)有的樣(yang)品都應管(guan)理好，按照規(gui)定(ding)的程序處理(li)樣(yang)品和檢測(ce)裝置。

試劑準(zhun)備

試劑盒(he)從冷藏(zang)環(huan)境(jing)中(zhong)取(qu)出(chu)應(ying)在(zai)室溫(wen)平衡後(hou)方(fang)可使用。

20×洗滌(di)緩(huan)沖液(ye)的稀(xi)釋(shi)：蒸(zheng)餾(liu)水按(an)1：20稀(xi)釋(shi)，即(ji)1份20×洗滌(di)緩(huan)沖液(ye)加19份蒸(zheng)餾(liu)水。

操作步(bu)驟(zhou)

1.   從室溫(wen)平衡20min後(hou)的鋁(lv)箔(bo)袋中(zhong)取(qu)出(chu)所(suo)需(xu)板條，剩余板條用自(zi)封(feng)袋密(mi)封(feng)放(fang)回4℃。
2.   設置標準(zhun)品孔和樣(yang)本孔(kong)，標準(zhun)品孔各(ge)加不(bu)同濃(nong)度的標準(zhun)品50μL；
3.   樣(yang)本孔(kong)中(zhong)加(jia)入待測(ce)樣(yang)本50μL；空白(bai)孔不(bu)加。
4.  除空(kong)白(bai)孔外，標準(zhun)品孔和樣(yang)本孔(kong)中(zhong)每孔加入辣根過(guo)氧(yang)化物酶（HRP）標記(ji)的檢測(ce)抗(kang)體(ti)100μL，用封(feng)板膜封(feng)住反應(ying)孔，37℃水浴(yu)鍋或(huo)恒(heng)溫(wen)箱(xiang)溫(wen)育(yu)60min。
5.   棄(qi)去(qu)液(ye)體(ti)，吸水(shui)紙(zhi)上(shang)拍(pai)幹，每孔加滿洗(xi)滌(di)液(ye)（350μL），靜置1min，甩去(qu)洗滌(di)液(ye)，吸水(shui)紙(zhi)上(shang)拍(pai)幹，如此(ci)重復(fu)洗(xi)板5次(ci)（也(ye)可用洗板機(ji)洗(xi)板）。
6.   每孔加入底(di)物A、B各(ge)50μL，37℃避(bi)光(guang)孵(fu)育(yu)15min。
7.   每孔加入終(zhong)止(zhi)液(ye)50μL，15min內，在(zai)450nm波長(chang)處測(ce)定(ding)各(ge)孔的OD值(zhi)。

實驗(yan)結果(guo)計(ji)算(suan)

以(yi)所測(ce)標準(zhun)品的OD值(zhi)為橫(heng)坐(zuo)標，標準(zhun)品的濃度值(zhi)為縱坐(zuo)標，在(zai)坐(zuo)標紙(zhi)上(shang)或(huo)用相(xiang)關(guan)軟(ruan)件繪制(zhi)標準(zhun)曲線，並得到(dao)直(zhi)線(xian)回歸方(fang)程(cheng)，將樣(yang)品的OD值(zhi)代(dai)入方(fang)程(cheng)，計(ji)算(suan)出樣(yang)品的濃度。

試劑盒(he)性能(neng)

1.  檢測(ce)範圍：0.5 μg/mL – 16 μg/mL。

2.  靈敏(min)度：zui低檢測(ce)濃(nong)度小(xiao)於(yu)0.1 μg/mL。

3.  特異性(xing)：不(bu)與(yu)其(qi)它(ta)可溶性結構(gou)類似物交叉反應(ying)。

4.  重復(fu)性(xing)：板內變異(yi)系數小(xiao)於(yu)10% ，板間變異系數小(xiao)於(yu)15% 。

說(shuo)明

1. 由(you)於現有條件及(ji)科(ke)學(xue)技術水平(ping)尚不(bu)能對所有(you)供貨(huo)商提(ti)供(gong)的所有(you)原料進行全(quan)面的鑒定(ding)與(yu)分析，本產(chan)品(pin)可能存在(zai)壹(yi)定的質量(liang)技術風險(xian)。
2. zui終(zhong)的實驗(yan)結果(guo)與(yu)試劑的有效(xiao)性、實驗(yan)者的相關(guan)操作以(yi)及(ji)當時(shi)的實驗(yan)環(huan)境(jing)密(mi)切相關(guan)，請(qing)務必準(zhun)備充足(zu)的標本(ben)備份。
3. 不(bu)同批(pi)次(ci)的同壹(yi)產品(pin)可能會有(you)少許差(cha)別(bie)，如(ru)：檢測(ce)限(xian)、靈敏(min)度以(yi)及(ji)顯(xian)色時(shi)間等，請(qing)依(yi)據試劑盒(he)內說(shuo)明書(shu)進(jin)行實驗(yan)操作，電子(zi)版(ban)說(shuo)明書(shu)僅作參(can)考(kao)。
4. 只有(you)全(quan)部使(shi)用本試劑盒(he)配(pei)套試劑才(cai)能保證檢測(ce)效(xiao)果(guo)，不(bu)能混用(yong)其(qi)他制(zhi)造(zao)商(shang)的產品(pin)。只有(you)嚴(yan)格(ge)遵(zun)守(shou)本(ben)試劑盒(he)的實驗(yan)說(shuo)明才(cai)會得到(dao)*的檢測(ce)結(jie)果(guo)。