ELISA試劑(ji)盒(he)操(cao)作(zuo)的(de)洗(xi)滌(di)方(fang)法

為(wei)了讓(rang)ELISA測試盒(he)更好(hao)的(de)發揮(hui)其(qi)作(zuo)用(yong)，我們要重視ELISA測試盒(he)的洗滌(di)和(he)保(bao)溫(wen)過(guo)程，下(xia)面具(ju)體來看(kan)下(xia)。

 ELISA測試盒(he)洗滌
按ELISA試劑(ji)盒(he)說(shuo)明書(shu)的(de)要(yao)求準(zhun)備(bei)實驗中需(xu)用(yong)的(de)試劑(ji)。ELISA中用(yong)的(de)蒸(zheng)餾水(shui)或去離(li)子水，包(bao)括用(yong)於(yu)洗滌的，應為(wei)新鮮(xian)的(de)和(he)高(gao)質量(liang)的。自(zi)配(pei)的緩沖液應用(yong)pH計(ji)測量(liang)較(jiao)正。從(cong)冰箱中取出的試驗用(yong)試劑(ji)應待(dai)溫(wen)度(du)與(yu)室溫(wen)平(ping)衡(heng)後使用(yong)。
洗(xi)滌在ELISA過(guo)程中雖不(bu)是壹(yi)個反應步(bu)驟(zhou)，但(dan)卻也(ye)決定著實(shi)驗的(de)成敗。ELISA測試盒(he)就是靠(kao)洗滌來達到(dao)分離(li)遊離(li)的和(he)結合的酶(mei)標記物(wu)的(de)目(mu)的(de)。通過(guo)洗滌(di)以(yi)清除殘(can)留在(zai)板(ban)孔(kong)中沒(mei)能(neng)與固相(xiang)抗原或抗體結合的物(wu)質(zhi)，以(yi)及在(zai)反應過(guo)程中非(fei)特(te)異性(xing)地(di)吸(xi)附(fu)於(yu)固相(xiang)載體的幹(gan)擾(rao)物(wu)質(zhi)。聚(ju)苯(ben)乙(yi)烯等(deng)塑(su)料(liao)對蛋(dan)白質的(de)吸(xi)附(fu)是(shi)普遍性(xing)的，而在(zai)洗(xi)滌時(shi)又應把這種(zhong)非(fei)特(te)異性(xing)吸(xi)附(fu)的(de)幹(gan)擾(rao)物(wu)質(zhi)洗(xi)滌(di)下(xia)來。可以(yi)說(shuo)在ELISA操(cao)作(zuo)中，洗滌是zui主(zhu)要(yao)的(de)關鍵技(ji)術(shu)，應引起操(cao)作(zuo)者(zhe)的高(gao)度重視，操(cao)作(zuo)者(zhe)應嚴格(ge)按要求洗(xi)滌(di)，不得(de)馬虎(hu)。
洗滌(di)的方(fang)式(shi)除某些ELISA儀器(qi)配(pei)有特(te)殊(shu)的自(zi)動(dong)洗(xi)滌(di)儀外(wai)，手工(gong)操(cao)作(zuo)有浸泡(pao)式(shi)和(he)流(liu)水沖洗式(shi)兩種(zhong)，過(guo)程如(ru)下(xia)：

1.浸泡(pao)式(shi)
a.吸(xi)幹(gan)或甩幹(gan)孔(kong)內反應液;b.用(yong)洗(xi)滌液過(guo)洗壹(yi)遍(將洗(xi)滌(di)液註(zhu)滿(man)板(ban)孔(kong)後，即(ji)甩去);c.浸泡(pao)，即(ji)將洗(xi)滌(di)液註(zhu)滿(man)板(ban)孔(kong)，放置1-2分鐘(zhong)，間(jian)歇搖動(dong)，浸泡(pao)時(shi)間(jian)不可隨意縮(suo)短(duan);d.吸(xi)幹(gan)孔(kong)內液體。吸(xi)幹(gan)應*，可用(yong)水(shui)泵或真(zhen)空泵(beng)抽(chou)吸(xi)，也(ye)可甩去液體後在(zai)清潔(jie)毛巾(jin)或吸(xi)水(shui)紙上(shang)拍(pai)幹(gan);e.重復操(cao)作(zuo)c和(he)d，洗(xi)滌3-4次(或按說(shuo)明規定)。在(zai)間(jian)接(jie)法(fa)中如(ru)本底較(jiao)高，可(ke)增加洗滌(di)次數或延長浸泡(pao)時(shi)間(jian)。
微量(liang)滴定板(ban)多采用(yong)浸泡(pao)式(shi)洗滌(di)法(fa)。洗(xi)滌液多為(wei)含非(fei)離(li)子型洗(xi)滌(di)劑的(de)中性(xing)緩沖液。聚(ju)苯(ben)乙(yi)烯載體與蛋(dan)白質的(de)結合是疏(shu)水(shui)性(xing)的，非(fei)離(li)子型洗(xi)滌(di)劑既(ji)含疏(shu)水基(ji)團，也(ye)含親(qin)水(shui)基(ji)團，其(qi)疏水(shui)基(ji)團與(yu)蛋(dan)白質的(de)疏(shu)水基(ji)團借(jie)疏水(shui)鍵結合，從而削弱(ruo)蛋(dan)白質與(yu)固相(xiang)載體的結合，並借(jie)助(zhu)於(yu)親(qin)水(shui)基(ji)團和(he)水(shui)分子的結合作用(yong)，使蛋(dan)白質回(hui)復到(dao)水溶液狀態，從而脫(tuo)離(li)固相(xiang)載體。洗滌(di)液中的非(fei)離(li)子型洗(xi)滌(di)劑壹(yi)般(ban)是吐(tu)溫(wen)20，其(qi)濃(nong)度可在(zai)0.05%-0.2%之(zhi)間(jian)，高於0.2%時(shi)，可使包(bao)被在(zai)固相(xiang)上的抗原或抗體解吸(xi)附(fu)而減(jian)低試驗的(de)靈(ling)敏度。

2.流水沖洗式(shi)
流水(shui)沖洗法(fa)zui初(chu)用(yong)於(yu)小珠(zhu)載體的洗(xi)滌(di)，洗滌(di)液僅(jin)為(wei)蒸(zheng)餾水(shui)甚至(zhi)可用(yong)自(zi)來水(shui)。洗滌(di)時附接(jie)壹(yi)特(te)殊(shu)裝(zhuang)置，使小珠(zhu)在流(liu)水(shui)沖擊下不斷(duan)地(di)滾動(dong)淋(lin)洗，持(chi)續沖洗2分鐘(zhong)後，吸(xi)幹(gan)液體，再用(yong)蒸(zheng)餾水(shui)浸泡(pao)2分鐘(zhong)，吸(xi)幹(gan)即(ji)可。浸泡(pao)式(shi)猶如(ru)盆浴，流(liu)水(shui)沖洗式(shi)則好(hao)比(bi)淋(lin)浴，其(qi)洗滌效果更(geng)為(wei)*，且也(ye)簡便(bian)、快(kuai)速。已有實(shi)驗表(biao)明(ming)，流水沖洗式(shi)同樣也(ye)適用(yong)於(yu)微量(liang)滴定板(ban)的洗(xi)滌(di)。洗(xi)滌時設法加大水(shui)流量(liang)或加大水(shui)壓(ya)，讓(rang)水流(liu)沖擊板(ban)孔(kong)表面，洗滌效果更(geng)佳。

ELISA測試盒(he)保溫(wen)
在(zai)ELISA測試盒(he)中壹(yi)般(ban)有兩次抗(kang)原(yuan)抗體反應，即(ji)加標本和(he)加酶(mei)結合物(wu)後。抗(kang)原抗體反應的完成需(xu)要有壹(yi)定的(de)溫(wen)度(du)和(he)時(shi)間(jian)，這壹(yi)保溫(wen)過(guo)程稱(cheng)為(wei)溫(wen)育(yu)(incubation)，有人(ren)稱之(zhi)為(wei)孵(fu)育(yu)，在ELISA中似不恰當(dang)。
ELISA屬固相(xiang)免疫測定，抗(kang)原、抗體的結合只在固相(xiang)表面上發生(sheng)。以(yi)抗體包(bao)被的(de)夾(jia)心(xin)法為(wei)例，加入板(ban)孔(kong)中的標本，其(qi)中的抗原並(bing)不(bu)是(shi)都有均(jun)等的(de)和(he)固相(xiang)抗結合的機(ji)會(hui)，只有zui貼(tie)近孔(kong)壁的(de)壹(yi)層(ceng)溶液中的抗原直接(jie)與(yu)抗體接(jie)觸(chu)。這是(shi)壹(yi)個逐步(bu)平(ping)衡(heng)的過(guo)程，因(yin)此需(xu)經擴(kuo)散才能(neng)達到(dao)反應的終點。在其(qi)後加入的酶(mei)標記抗體與固相(xiang)抗原的結合也(ye)同樣如(ru)此(ci)。這就(jiu)是(shi)為(wei)什(shen)麽(me)ELISA反應總是需(xu)要壹(yi)定時(shi)間(jian)的溫(wen)育(yu)。
溫(wen)育(yu)常采用(yong)的(de)溫(wen)度(du)有43℃、37℃、室(shi)溫(wen)和(he)4℃(冰(bing)箱溫(wen)度(du))等(deng)。37℃是實驗室(shi)中常用(yong)的(de)保溫(wen)溫(wen)度(du)，也(ye)是大(da)多數抗(kang)原(yuan)抗體結合的合(he)適溫(wen)度(du)。ELISA試劑(ji)盒(he)在建立(li)ELISA方(fang)法作(zuo)反應動(dong)力(li)學(xue)研究(jiu)時(shi)，實(shi)驗表(biao)明(ming)，兩次抗(kang)原(yuan)抗體反應壹(yi)般(ban)在37℃經(jing)1-2小時，產物(wu)的(de)生(sheng)成可達。為(wei)加速反應，可提(ti)高反應的溫(wen)度(du)，有些試驗在(zai)43℃進(jin)行(xing)，但(dan)不宜(yi)采用(yong)更(geng)高的溫(wen)度(du)。抗(kang)原抗體反應4℃更為(wei)*，在放射(she)免(mian)疫測定中多使反應在冰箱中放置壹(yi)夜(ye)，以(yi)形成zui多的(de)沈(chen)澱(dian)。但(dan)因所(suo)需(xu)時間(jian)太(tai)長，在ELISA中壹(yi)般(ban)不予采用(yong)。
保(bao)溫(wen)的(de)方(fang)式(shi)除有的(de)ELISA儀(yi)器附(fu)有特(te)制(zhi)的電(dian)熱(re)塊(kuai)外(wai)，壹(yi)般(ban)均(jun)采用(yong)水(shui)浴，可將ELISA板(ban)置於(yu)水(shui)浴(yu)箱中，ELISA板(ban)底應貼(tie)著水(shui)面，使溫(wen)度(du)迅(xun)速平衡(heng)。為(wei)避(bi)免蒸(zheng)發，板(ban)上應加蓋，也(ye)可用(yong)塑(su)料(liao)貼(tie)封紙或保鮮(xian)膜(mo)覆蓋板(ban)孔(kong)，此時可讓反應板(ban)漂浮(fu)在水(shui)面(mian)上(shang)。若用(yong)保(bao)溫(wen)箱，ELISA板(ban)應放在濕盒(he)內，濕盒(he)要選用(yong)傳(chuan)熱(re)性(xing)良好(hao)的(de)材(cai)料(liao)如(ru)金(jin)屬等(deng)，在盒(he)底墊(dian)濕的(de)紗布(bu)，zui後將ELISA板(ban)放在濕紗(sha)布(bu)上。濕盒(he)應先(xian)放在保(bao)溫(wen)箱中預溫(wen)至(zhi)規定的(de)溫(wen)度(du)，特(te)別是(shi)在氣溫(wen)較(jiao)低的(de)時候(hou)更應如(ru)此(ci)。無(wu)論是水浴還是(shi)濕盒(he)溫(wen)育(yu)，反應板(ban)均(jun)不宜(yi)疊(die)放，以(yi)保證(zheng)各(ge)板(ban)的溫(wen)度(du)都(dou)能迅(xun)速平衡(heng)。
室溫(wen)溫(wen)育(yu)的反應，操(cao)作(zuo)時(shi)的(de)室(shi)溫(wen)應嚴格(ge)限(xian)制(zhi)在規定的(de)範圍內，標準(zhun)室(shi)溫(wen)溫(wen)度(du)是(shi)指(zhi)20-25℃，但(dan)具體操(cao)作(zuo)時(shi)可(ke)根據說(shuo)明書(shu)的(de)要(yao)求控(kong)制(zhi)溫(wen)育(yu)。室溫(wen)溫(wen)育(yu)時，ELISA板(ban)只要平(ping)置(zhi)於操(cao)作(zuo)臺(tai)上(shang)即(ji)可。應註(zhu)意溫(wen)育(yu)的溫(wen)度(du)和(he)時(shi)間(jian)應按規定力(li)求準(zhun)確(que)。為(wei)保證(zheng)這壹(yi)點，壹(yi)個人(ren)操(cao)作(zuo)時(shi)，壹(yi)次不(bu)宜(yi)多於(yu)兩塊(kuai)板(ban)同時(shi)測定。
了(le)解更多關於ELISA測試盒(he)的信(xin)息，咨詢!