馬Elisa試劑(ji)盒試驗(yan)以(yi)靈敏(min)度較(jiao)高(gao)、特(te)異性較(jiao)好的特(te)點(dian)在臨床(chuang)上得到了廣(guang)泛的應用,但操(cao)作中的各(ge)個(ge)環節對(dui)試驗(yan)的檢(jian)測(ce)效果(guo)影響較(jiao)大(da),如(ru)不(bu)註意,有可(ke)能導(dao)致顯色不全(quan)、花(hua)板(ban)等結(jie)果(guo)。下面我們(men)談(tan)談操(cao)作中各(ge)個(ge)環節常出現問(wen)題的原(yuan)因(yin)及解(jie)決辦(ban)法。
下面分(fen)析(xi)馬Elisa試劑(ji)盒試驗(yan)操(cao)作中可(ke)能影響結(jie)果(guo)的原(yuan)因(yin),並給出相(xiang)應的解決辦(ban)法
選擇(ze)馬Elisa試劑(ji)盒:選擇(ze)質量優(you)良(liang)的檢(jian)測(ce)試劑(ji),嚴格(ge)按照試劑(ji)說(shuo)明書(shu)進行(xing)操(cao)作,操(cao)作前(qian)將試劑(ji)在室(shi)溫下平衡(heng)30-60分鐘(zhong)。
2加樣(yang)可(ke)能原(yuan)因(yin):)血(xue)清(qing)或血(xue)漿標(biao)本(ben)分(fen)離(li)不(bu)好即進行(xing)加樣(yang);2)手工(gong)操(cao)作中,加樣(yang)板(ban)過多(duo)造成(cheng)加樣後放入孵箱前等待時(shi)間過長(chang)(特(te)別(bie)是(shi)室(shi)內溫度(du)較(jiao)高(gao)時(shi));
3)加完(wan)標(biao)本(ben)再加酶試劑(ji)時(shi)酶濺出孔外。解決(jue)辦(ban)法:)標(biao)本(ben)為(wei)血(xue)清(qing):將血(xue)液(ye)先(xian)自(zi)然存(cun)放-2小時(shi)後,再用3000rmp離心5分鐘(zhong);標本(ben)為(wei)血(xue)漿:必(bi)須(xu)使用含抗(kang)凝(ning)劑(ji)的血(xue)液(ye)標(biao)本(ben)收(shou)集管,采血(xue)後必(bi)須(xu)立即顛倒(dao)混(hun)合5-0次,放置(zhi)壹段時(shi)間後,3000rpm離心(xin)5分鐘(zhong);若在幾(ji)天內檢(jian)測(ce),可(ke)放在2-8℃冰箱(xiang)中,若要(yao)貯存(cun),則(ze)置(zhi)於(yu)-20℃的低溫冰箱(xiang)內。2)加樣(yang)後及時(shi)放入孵箱。3)加酶試劑(ji)後用吸(xi)水紙(zhi)在酶標板(ban)表面輕(qing)拭(shi)吸(xi)幹(gan)。4)如(ru)果(guo)采用AT或其他全自(zi)動加(jia)樣(yang),選擇(ze)FAME或其他後處(chu)理(li)儀(yi)器加酶試劑(ji)。5)標(biao)本(ben)較(jiao)多(duo)時(shi),請(qing)分批(pi)操(cao)作。
3孵(fu)育(yu)可(ke)能原(yuan)因(yin):)孵育(yu)時(shi)未貼(tie)封(feng)片或加蓋,使標本(ben)或(huo)稀(xi)釋(shi)液(ye)蒸(zheng)發,吸(xi)附(fu)於孔壁(bi),難於(yu)清(qing)洗*;2)孵育(yu)時(shi)間人(ren)為延(yan)長(chang),導致非(fei)特(te)異性結(jie)合緊(jin)附(fu)於反(fan)應孔周圍(wei),難以(yi)清(qing)洗*。解決辦(ban)法:)貼(tie)封(feng)片或加蓋;2)按說(shuo)明步驟(zhou)嚴格(ge)控(kong)制(zhi)操(cao)作時(shi)間。
4洗板(ban)可(ke)能原(yuan)因(yin):)采用手工洗板(ban),孔與孔之間液(ye)體交(jiao)叉。2)采用半自動(dong)洗板(ban)機洗板(ban)時(shi),洗液(ye)量(liang)不(bu)足(zu),導(dao)致洗板(ban)不*;洗板(ban)針(zhen)堵(du)塞(sai),抽吸(xi)不*;洗板(ban)不暢,導致洗板(ban)效果(guo)差。3)反(fan)應板(ban)過多(duo)造成(cheng)洗板(ban)等待時(shi)間長(chang)。解(jie)決(jue)辦(ban)法:)保(bao)證洗液(ye)註(zhu)滿(man)各(ge)孔,洗板(ban)針(zhen)暢(chang)通,洗完板(ban)後在吸(xi)水紙(zhi)(選擇(ze)幹(gan)凈(jing)、無(wu)或少(shao)塵的吸(xi)水材(cai)料)上(shang)輕輕拍(pai)幹(gan);2)合(he)理(li)安排(pai),或(huo)多(duo)用幾(ji)臺洗板(ban)機。
5顯色可(ke)能原(yuan)因(yin):)顯色劑(ji)配制(zhi)後放置(zhi)時(shi)間過長(chang)或使用過期顯色劑(ji);2)加(jia)顯色劑(ji)時(shi)濺出孔外造成(cheng)液(ye)體回流。解(jie)決(jue)辦(ban)法:)顯色劑(ji)盡量在臨用前配制(zhi),堅(jian)持不(bu)用過期顯色劑(ji),肉眼(yan)可(ke)見淺(qian)藍色的TMB顯色劑(ji)不(bu)用;2)加樣時(shi)保(bao)持顯色劑(ji)不(bu)外流;3)A、B液(ye)應避(bi)免接(jie)觸(chu)金屬器(qi)械。6終(zhong)止可(ke)能原(yuan)因(yin)如(ru)加(jia)終止液(ye)時(shi)產生較(jiao)多(duo)氣泡(pao),導致假(jia)陽性增加(jia)。所以(yi)在加終(zhong)止液(ye)時(shi)應避(bi)免產生氣泡(pao)。7讀(du)板(ban)如(ru)讀(du)板(ban)時(shi)板(ban)底不清(qing)潔等。應保(bao)證酶標板(ban)清(qing)潔。
所以(yi)在整個(ge)操(cao)作過程(cheng)中保(bao)證酶標板(ban)不接(jie)觸(chu)次氯(lv)酸;盡可(ke)能實(shi)現馬Elisa試劑(ji)盒檢(jian)測(ce)標準自動(dong)化(hua),有效提高(gao)檢(jian)測(ce)質量。