原(yuan)裝(zhuang)進口elisa試劑盒應用(yong)雙抗體夾心(xin)法(fa)測定標(biao)本(ben)中小(xiao)鼠(shu)遊(you)離脂(zhi)肪酸(FFA)水(shui)平(ping)。用(yong)純(chun)化(hua)的(de)小鼠(shu)遊(you)離脂(zhi)肪酸(FFA)抗體包被(bei)微孔(kong)板,制(zhi)成(cheng)固相抗體,往包被(bei)單(dan)抗(kang)的(de)微孔(kong)中依次(ci)加入(ru)遊(you)離脂(zhi)肪酸(FFA),再與HRP標記(ji)的(de)遊(you)離脂(zhi)肪酸(FFA)抗體結合,形成抗體-抗原(yuan)-酶標抗(kang)體復合物,經過(guo)*洗滌後(hou)加底物TMB顯色(se)。TMB在(zai)HRP酶的(de)催化(hua)下轉(zhuan)化(hua)成藍(lan)色,並在(zai)酸的(de)作用下轉(zhuan)化(hua)成醉(zui)終(zhong)的(de)黃(huang)色。顏色的(de)深淺(qian)和(he)樣品中(zhong)的(de)遊(you)離脂(zhi)肪酸(FFA)呈(cheng)正(zheng)相關。用(yong)酶標儀(yi)在(zai)450nm波(bo)長下(xia)測定吸(xi)光度(OD值),通(tong)過(guo)標準(zhun)曲(qu)線(xian)計算樣品中(zhong)小(xiao)鼠遊(you)離脂(zhi)肪酸(FFA)濃度。
原裝(zhuang)進口elisa試劑盒的(de)問題(ti)解析:
1、試劑的(de)選擇:選擇優(you)良試(shi)劑(ji)大家都(dou)是(shi)知(zhi)道(dao)的(de),但(dan)是在(zai)檢測之(zhi)前還應該(gai)提前半個小時(shi)將(jiang)試劑(ji)拿到(dao)常(chang)溫(wen)下進行(xing)解凍。
2、加樣中(zhong)可(ke)能遇(yu)到(dao)的(de)問題(ti):在(zai)做(zuo)血清(qing)或(huo)是血漿用於(yu)檢測試(shi)劑(ji)的(de)時(shi)候(hou),會(hui)碰(peng)到(dao)血清(qing)血漿不(bu)好分離的(de)情況(kuang),這個時(shi)候(hou)的(de)解決辦(ban)法(fa)是(shi)先(xian)放在(zai)常(chang)溫(wen)中1到(dao)2小(xiao)時(shi),然(ran)後(hou)在(zai)進(jin)行(xing)離心(xin)處理(li)
3、洗板(ban)時(shi)容(rong)易造(zao)成(cheng)誤差(cha):因為洗板(ban)是(shi)人工(gong)洗的(de),所以(yi)判斷什麽(me)時(shi)候(hou)洗幹(gan)凈(jing)了也(ye)是人為(wei)判斷的(de),這個時(shi)候(hou)帶有(you)主(zhu)觀(guan)色(se)彩(cai),所(suo)以多清(qing)洗幾(ji)次(ci),還有(you)就(jiu)是在(zai)洗的(de)時(shi)候(hou)孔(kong)與孔(kong)之(zhi)間的(de)液體容易交(jiao)叉(cha)流動(dong)
4、顯(xian)色(se)問(wen)題(ti): 使(shi)用(yong)了過期(qi)的(de)顯色(se)劑或(huo)者是(shi)顯(xian)色(se)劑用(yong)過(guo)後(hou)放置(zhi)時(shi)間太長(chang),都(dou)有(you)可能造(zao)成(cheng)顯色劑不(bu)顯(xian)色(se)。所以在(zai)進(jin)行(xing)顯(xian)色反應的(de)時(shi)候(hou),要(yao)先(xian)查(zha)看(kan)顯(xian)色劑本身的(de)情況(kuang)
5、終(zhong)止(zhi)反(fan)應:在(zai)加終(zhong)止(zhi)劑(ji)的(de)時(shi)候(hou)由於傾(qing)倒速度快,差(cha)生氣泡,造(zao)成(cheng)假陽(yang)性(xing)結果。所(suo)以在(zai)倒終(zhong)止(zhi)劑(ji)的(de)時(shi)候(hou)要(yao)緩(huan)慢(man)倒
6、讀板(ban):讀板(ban)的(de)時(shi)候(hou)首(shou)先(xian)應該(gai)保證(zheng)板(ban)的(de)清潔幹凈(jing)