雞傳(chuan)染(ran)性(xing)法氏(shi)囊病毒抗(kang)體（IBDV Ab）試劑盒（ELISA）檢(jian)測說(shuo)明(ming)書

雞傳(chuan)染(ran)性(xing)法氏(shi)囊病毒抗(kang)體（IBDV Ab）試劑盒（ELISA）檢(jian)測說(shuo)明(ming)書

原理(li)：

試劑盒采(cai)用間(jian)接法酶(mei)聯(lian)免疫(yi)吸附試驗（ELISA）。往(wang)預先(xian)包(bao)被雞(ji)傳(chuan)染(ran)性(xing)法氏(shi)囊病毒抗(kang)體（IBDV Ab）捕(bu)獲(huo)抗(kang)原(yuan)的(de)包被微(wei)孔(kong)中(zhong)，依次加(jia)入標本、標準品(pin)、HRP標記的(de)檢(jian)測抗(kang)體(ti)，經過溫(wen)育(yu)並(bing)*洗滌。用(yong)底(di)物(wu)TMB顯(xian)色(se)，TMB在(zai)過氧化物(wu)酶的(de)催(cui)化(hua)下轉(zhuan)化(hua)成藍(lan)色，並(bing)在(zai)酸(suan)的(de)作用(yong)下(xia)轉(zhuan)化(hua)成最(zui)終(zhong)的(de)黃色(se)。顏(yan)色(se)的(de)深(shen)淺(qian)和樣品(pin)中(zhong)的(de)雞傳(chuan)染(ran)性(xing)法氏(shi)囊病毒抗(kang)體（IBDV Ab）呈(cheng)正相(xiang)關(guan)。用酶(mei)標儀在(zai)450nm 波(bo)長(chang)下(xia)測定吸光度(du)（OD 值），計(ji)算樣品(pin)濃度(du)。

操作步(bu)驟(zhou)

1.  從室(shi)溫(wen)平衡(heng)20min後的(de)鋁(lv)箔(bo)袋(dai)中(zhong)取出(chu)所需(xu)板條(tiao)，剩(sheng)余(yu)板條(tiao)用自(zi)封(feng)袋(dai)密(mi)封(feng)放(fang)回(hui)4℃。

2.  設置標準品(pin)孔和樣本孔，標準品(pin)孔各(ge)加(jia)不(bu)同(tong)濃度(du)的(de)標準品(pin)50μL；

3.  樣本孔中(zhong)加入(ru)待測(ce)樣(yang)本50μL；空(kong)白(bai)孔(kong)不(bu)加(jia)。

4.  除空(kong)白(bai)孔(kong)外，標準品(pin)孔和樣本孔中(zhong)每孔(kong)加入(ru)辣根過氧化物(wu)酶（HRP）標記的(de)檢(jian)測抗(kang)體(ti)100μL，用封板膜(mo)封(feng)住(zhu)反應(ying)孔(kong)，37℃水浴(yu)鍋(guo)或恒(heng)溫(wen)箱(xiang)溫(wen)育(yu)60min。

5.  棄(qi)去(qu)液(ye)體(ti)，吸水紙(zhi)上拍幹，每孔(kong)加滿(man)洗滌液(ye)（350μL），靜(jing)置1min，甩(shuai)去(qu)洗滌液(ye)，吸水紙(zhi)上拍幹，如(ru)此(ci)重(zhong)復洗板5次(ci)（也可用(yong)洗板機洗板）。

6.  每孔(kong)加入(ru)底(di)物(wu)A、B各50μL，37℃避(bi)光孵(fu)育(yu)15min。

  每孔(kong)加入(ru)終(zhong)止(zhi)液(ye)50μL，15min內(nei)，在450nm波(bo)長(chang)處(chu)測定各孔(kong)的(de)OD值。

 檢(jian)測範(fan)圍(wei)：6.25 ng/mL~ 200 ng/mL。

需(xu)要(yao)而(er)未提(ti)供(gong)的(de)試劑和器(qi)材(cai)

1. 酶標儀（450nm）

2. 高(gao)精(jing)度(du)加樣(yang)器(qi)及(ji)槍(qiang)頭(tou)：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫(wen)箱(xiang)

4. 蒸餾(liu)水(shui)或(huo)去(qu)離子水