細小(xiao)病(bing)毒抗(kang)體(ti)檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒(he)（酶(mei)聯免(mian)疫法(fa)） 使(shi)用(yong)說(shuo)明(ming)書(shu)

細(xi)小病毒抗(kang)體(ti)檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒(he)（酶(mei)聯免(mian)疫法(fa)）

使(shi)用(yong)說(shuo)明(ming)書(shu)

【產(chan)品名(ming)稱(cheng)】

通用(yong)名(ming)：豬(zhu)細(xi)小(xiao)病(bing)毒抗(kang)體(ti)檢(jian)測(ce)試劑(ji)盒(he)（酶(mei)聯免(mian)疫法(fa)）

英文名(ming)：Test Kit for Antibodies to Porcine Parvovirus  （ELISA）

【包(bao)裝(zhuang)規格】 96T×1/盒(he)、96T×2/盒、96T×5/盒

【預(yu)期用(yong)途】 豬(zhu)細(xi)小(xiao)病(bing)毒病(bing)是(shi)由(you)豬(zhu)細(xi)小(xiao)病(bing)毒（Porcine Parvovirus，PPV）引(yin)起的(de)豬(zhu)的(de)繁(fan)殖(zhi)障(zhang)礙(ai)性疾(ji)病(bing)，其特(te)征為(wei)受感染(ran)的(de)母(mu)豬(zhu)，特(te)別是(shi)初(chu)產(chan)母豬(zhu)產(chan)出死(si)胎、畸(ji)形(xing)胎、木(mu)乃(nai)伊(yi)胎及(ji)病弱仔(zai)豬(zhu)，而(er)母(mu)豬(zhu)本(ben)身(shen)無(wu)明(ming)顯癥(zheng)狀(zhuang)。

本(ben)試劑(ji)用(yong)於(yu)檢(jian)測(ce)豬(zhu)血(xue)清(qing)中豬(zhu)細(xi)小(xiao)病(bing)毒抗(kang)體(ti)，可(ke)用(yong)於(yu)豬(zhu)細(xi)小(xiao)病(bing)毒疫苗(miao)免(mian)疫效果(guo)評價。

【原    理】

    本(ben)試劑(ji)盒(he)由(you)預(yu)包(bao)被豬(zhu)細(xi)小(xiao)病(bing)毒抗(kang)原的(de)酶(mei)標板、酶(mei)標記(ji)物(wu)及(ji)其他(ta)配(pei)套試(shi)劑(ji)組成(cheng)，應用(yong)酶(mei)聯免(mian)疫法(fa)（ELISA）原理檢(jian)測(ce)豬(zhu)血(xue)清(qing)、血漿(jiang)樣(yang)本(ben)中豬(zhu)細(xi)小(xiao)病(bing)毒抗(kang)體(ti)。實(shi)驗(yan)時在(zai)酶(mei)標板(ban)中加入(ru)對(dui)照(zhao)血(xue)清(qing)和待(dai)檢樣(yang)本(ben)，經溫(wen)育(yu)後(hou)若(ruo)樣(yang)品中(zhong)含有豬(zhu)細(xi)小(xiao)病(bing)毒抗(kang)體(ti)，則將與(yu)酶(mei)標板(ban)上(shang)抗(kang)原結合(he)，經(jing)洗滌除去(qu)未(wei)結(jie)合(he)的(de)其他(ta)成(cheng)分後(hou)；再加入(ru)酶(mei)標記(ji)物(wu)，與(yu)酶(mei)標板(ban)上(shang)抗(kang)原抗(kang)體(ti)復(fu)合物(wu)發(fa)生(sheng)特異(yi)性結合(he)；再經(jing)洗滌除去(qu)未(wei)結(jie)合(he)的(de)酶(mei)標記(ji)物(wu)，在(zai)孔(kong)中加TMB底物(wu)液(ye)，與(yu)酶(mei)標結合物(wu)反(fan)應形(xing)成(cheng)藍色(se)產(chan)物(wu)，顯色(se)深淺與樣(yang)品中(zhong)的(de)特(te)異(yi)性抗(kang)體(ti)含(han)量成(cheng)正相(xiang)關；加入(ru)終止液(ye)終止反(fan)應後(hou)，產(chan)物(wu)變為(wei)黃色(se)；用(yong)酶(mei)標儀在450nm波(bo)長測(ce)定各(ge)反(fan)應孔(kong)中的(de)吸(xi)光(guang)值(zhi)，即(ji)可(ke)知樣(yang)品是(shi)否含(han)有(you)豬(zhu)細(xi)小(xiao)病(bing)毒抗(kang)體(ti)。

【試(shi)劑(ji)盒(he)組成(cheng)】

【儲(chu)存及有(you)效期】 2～8℃保(bao)存，有效期12個月。

包(bao)被板(ban)開封後(hou)請於(yu)2～8℃避(bi)光(guang)保(bao)存，避(bi)免(mian)受(shou)潮(chao)。使用(yong)期限(xian)為(wei)2個月。

【適(shi)用(yong)儀(yi)器(qi)】 含(han)450nm、630nm波長的(de)酶(mei)標儀，37℃恒(heng)溫(wen)設(she)備(bei)，可調(tiao)微(wei)量移液(ye)器(qi)。

【樣(yang)品準(zhun)備(bei)】

1.取動物(wu)全血(xue)按(an)常規方法(fa)制(zhi)備(bei)血清(qing)，要求血(xue)清(qing)清(qing)亮(liang)，無溶(rong)血、無(wu)汙(wu)染(ran)。樣(yang)品1周(zhou)內可(ke)於(yu)2～8℃保(bao)存，長期需(xu)置-20℃保(bao)存。

2.用(yong)樣(yang)品稀釋液將待(dai)檢血清(qing)按(an)40倍稀釋（如(ru)5μl血清(qing)加入(ru)195μl樣(yang)品稀釋液中(zhong)，混勻(yun)）。陰、陽性對(dui)照(zhao)不(bu)用(yong)稀釋。

3.濃(nong)縮洗滌液(ye)使(shi)用(yong)前應恢復(fu)至(zhi)室溫(wen)使沈(chen)澱溶(rong)解，然後(hou)用(yong)蒸(zheng)餾(liu)水或(huo)去(qu)離(li)子水作(zuo)20倍(bei)稀釋成(cheng)工作(zuo)洗(xi)滌液(ye)(如(ru)19份蒸(zheng)餾(liu)水或(huo)去(qu)離(li)子水+1份濃(nong)縮洗滌液(ye))。

【檢(jian)驗(yan)方法(fa)】

1.使(shi)用(yong)前將試(shi)劑(ji)盒(he)置室溫30分鐘，恢復(fu)至(zhi)室溫(wen)。

2.取所(suo)需(xu)用(yong)量(liang)酶(mei)標板(ban)條(tiao)，設(she)空白(bai)對(dui)照(zhao)1孔(kong)、陰性/陽性對(dui)照(zhao)各(ge)2孔(kong)，未(wei)用(yong)的(de)板(ban)條(tiao)盡快密(mi)封，2～8℃保(bao)存。

3.空白(bai)對(dui)照(zhao)孔(kong)加樣(yang)品稀釋液100μl；陰(yin)、陽性對(dui)照(zhao)孔(kong)分別加入(ru)陰、陽性對(dui)照(zhao)100μl；樣(yang)品孔(kong)每(mei)孔加入(ru)稀釋後(hou)的(de)樣(yang)品100μl。

4.混勻(yun)，蓋好(hao)蓋板膜(mo)，置37℃（推(tui)薦水浴(yu)）避(bi)光(guang)反(fan)應30分(fen)鐘。

5.甩去(qu)孔(kong)內液(ye)體(ti)，每(mei)孔加350 ul工作(zuo)洗(xi)滌液(ye)，靜(jing)置30秒後(hou)棄(qi)去(qu)，重(zhong)復洗(xi)滌5次，最(zui)後(hou)壹次拍(pai)幹(gan)。

6.每(mei)孔加酶(mei)標記(ji)物(wu)100μl（空白(bai)孔除外）。蓋好(hao)蓋板(ban)膜，置37℃避(bi)光(guang)反(fan)應30分(fen)鐘。

7.洗(xi)滌，同(tong)步(bu)驟(zhou)5。

8.每(mei)孔依(yi)次加底物(wu)液(ye)A、底物(wu)液(ye)B各(ge)50μl，混勻(yun)，蓋好(hao)蓋板膜(mo)，置37℃避(bi)光(guang)反(fan)應10分(fen)鐘。

9.每(mei)孔加終(zhong)止液(ye)50μl，混勻(yun)，於450nm(可(ke)用(yong)630nm作(zuo)參(can)比波長）測(ce)定各(ge)孔(kong)吸(xi)光(guang)值(zhi)，無參比波長用(yong)空白(bai)孔調(tiao)零(ling)(即所(suo)有(you)孔吸光值(zhi)減(jian)去(qu)空白(bai)孔吸(xi)光(guang)值(zhi))。

【參(can)考值】 實(shi)驗(yan)正常的(de)情(qing)況下(xia)，陰性對(dui)照(zhao)的(de)平(ping)均(jun)OD值(zhi)即ODNC應(ying)≤0.3，陽性對(dui)照(zhao)的(de)平(ping)均(jun)OD值(zhi)即ODPC應(ying)≥0.6。

【檢(jian)驗(yan)結果(guo)的(de)判定】

1.樣(yang)品的(de)OD值(zhi)即(ji)ODS；

2.閾(yu)值計算：SP值(zhi)=（ODS-ODNC）/（ODPC-ODNC）；

SP值(zhi)≥0.2，結(jie)果(guo)判定為(wei)陽性；SP值＜0.2，結(jie)果(guo)判定為(wei)陰性。

3.本(ben)實驗(yan)結果(guo)為(wei)陰性時表明(ming)豬(zhu)只(zhi)抗(kang)體(ti)水平(ping)不(bu)足，建(jian)議(yi)補(bu)打相(xiang)應疫苗(miao)。

【試(shi)驗(yan)方法(fa)的(de)局限(xian)性】

    該(gai)試驗(yan)僅作(zuo)為(wei)定性檢測(ce)豬(zhu)血(xue)清(qing)、血漿(jiang)中豬(zhu)細(xi)小(xiao)病(bing)毒抗(kang)體(ti)，根(gen)據SP值高低(di)可(ke)作(zuo)抗(kang)體(ti)水平(ping)強(qiang)、中、弱的(de)粗(cu)略(lve)評(ping)估(gu)。

【註(zhu)意事項(xiang)】

1.實(shi)驗(yan)操作(zuo)時(shi)需(xu)戴(dai)手套、穿工作(zuo)衣(yi)，嚴(yan)格健全和(he)執(zhi)行消(xiao)毒隔離(li)制(zhi)度(du)，各(ge)種實驗(yan)廢棄(qi)物(wu)都(dou)應按(an)傳染(ran)物(wu)處理(li)。

2.終(zhong)止液(ye)具有腐蝕性，應避(bi)免(mian)接觸(chu)皮(pi)膚(fu)和衣(yi)物(wu)，如(ru)不慎接觸(chu)請(qing)立即用(yong)大(da)量(liang)自來水沖洗。

3.酶(mei)標板(ban)從冷藏(zang)環境中取出(chu)時應恢(hui)復至(zhi)室溫(wen)方可開袋(dai)，未(wei)用(yong)完的(de)酶(mei)標板(ban)需(xu)放入(ru)有幹(gan)燥劑(ji)的(de)密(mi)封袋(dai)中保(bao)存。

4.濃(nong)縮洗滌液(ye)在(zai)低溫(wen)時容易(yi)結晶，使(shi)用(yong)時(shi)需(xu)恢復至(zhi)室溫(wen)以*溶解(jie)。

5.洗(xi)滌時(shi)各(ge)孔(kong)均(jun)需(xu)加滿液(ye)體(ti)，防(fang)止孔(kong)口(kou)有遊(you)離(li)酶(mei)不能(neng)洗凈。

6.用(yong)於(yu)檢(jian)測(ce)的(de)樣(yang)品應(ying)保(bao)持(chi)新(xin)鮮(xian)。

7.試(shi)驗(yan)結果(guo)的(de)判定必須(xu)以酶(mei)標儀讀(du)數(shu)為(wei)準(zhun)。

8.不(bu)同批(pi)號(hao)試(shi)劑(ji)組分(fen)不(bu)得(de)混用(yong)。