ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)血清、血(xue)漿、細胞(bao)樣本(ben)的(de)收集(ji)及(ji)處(chu)理方(fang)法(fa)

1、血清：用(yong)無菌管收集(ji)，室(shi)溫(wen)血(xue)液自(zi)然(ran)凝固(gu)10-20分(fen)鐘(zhong)，2-8℃條(tiao)件(jian)離(li)心(xin)20分(fen)鐘(zhong)左(zuo)右(you)（2000-3000轉/分(fen)），仔(zai)細收集(ji)上(shang)清，保(bao)存過程(cheng)中如出(chu)現(xian)沈澱(dian)，應(ying)再(zai)次離心。

2、血(xue)漿(jiang)：應(ying)根(gen)據(ju)標本(ben)的(de)要(yao)求(qiu)選擇EDTA或(huo)檸檬(meng)酸(suan)鈉作為抗凝劑(ji)抗凝劑(ji)，混合10-20分(fen)鐘(zhong)後(hou)，2-8℃條(tiao)件(jian)離(li)心(xin)20分(fen)鐘(zhong)左(zuo)右(you)（2000-3000轉/分(fen)），仔(zai)細收集(ji)上(shang)清，保(bao)存過程(cheng)中如有(you)沈澱(dian)形(xing)成，應(ying)該(gai)再(zai)次離心。

4細胞(bao)樣(yang)品前(qian)處(chu)理：

a)對於貼壁細胞(bao)：去除(chu)培(pei)養(yang)液(ye)，用(yong) PBS、生理鹽(yan)水(shui)或(huo)無血清培(pei)養(yang)液(ye)洗(xi)壹遍。按(an)照(zhao) 6 孔板(ban)每孔細胞(bao)量加(jia)入150-250 ul裂解液的比(bi)例(li)加(jia)入裂解液。用(yong)槍吹(chui)打數(shu)下，使(shi)裂解液和(he)細胞(bao)充分(fen)接觸。

b)對於懸浮(fu)細胞(bao)：離心收集(ji)細胞(bao)，用(yong)手指把(ba)細胞(bao)用(yong)力彈散(san)。按(an)照(zhao) 6 孔板(ban)每孔細胞(bao)量加(jia)入 150-250 ul 裂解液的比(bi)例(li)加(jia)入裂解液，再(zai)用(yong)手指輕(qing)彈以(yi)充分(fen)裂解細胞(bao)。充分(fen)裂解後(hou)應(ying)沒(mei)有明顯的細胞(bao)沈澱(dian)。如(ru)果細胞(bao)量較多(duo)，必(bi)需(xu)分(fen)裝成50-100萬(wan)細胞(bao)/管，然(ran)後(hou)再(zai)裂解。

c)對(dui)於組織(zhi)樣(yang)品(pin)： 把(ba)組(zu)織(zhi)剪切成細小(xiao)的碎片。按(an)照(zhao)每20mg組(zu)織(zhi)加(jia)入150-250 ul裂解液的比(bi)例(li)加(jia)入裂解液。 (如果裂解不充分(fen)可(ke)以(yi)適當(dang)添(tian)加(jia)更(geng)多(duo)的裂解液，如果需(xu)要(yao)高濃(nong)度(du)的蛋(dan)白樣品，可(ke)以(yi)適當(dang)減(jian)少(shao)裂解液的用(yong)量)。

用(yong)玻璃勻漿器(qi)勻(yun)漿(jiang)，直(zhi)至充(chong)分(fen)裂解。

2、後(hou)處(chu)理：

將(jiang)裂解後(hou)的樣品(pin)10000-14000g離(li)心(xin)3-5分(fen)鐘(zhong)，取(qu)上(shang)清，即可(ke)進行(xing)後(hou)續的ELISA、Western和(he)免疫沈澱(dian)等(deng)操(cao)作。