實(shi)驗(yan)原理(li)-大(da)鼠白細胞介素13ELISA檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒(he)

實(shi)驗(yan)原理(li)-大(da)鼠白細胞介素13ELISA檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒(he)

試劑(ji)盒(he)組成(cheng)及(ji)試劑(ji)配(pei)制 

1. 酶聯板(ban)（Assay plate ）：壹(yi)塊（96孔(kong)）。 

2. 標準品(pin)（Standard）：6瓶。

3. 生物(wu)素(su)標記(ji)抗體稀釋(shi)液(ye)（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。

4. 辣(la)根(gen)過(guo)氧化物酶(mei)標記(ji)親(qin)和素稀釋(shi)液(ye) （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。

5. 生物(wu)素(su)標記(ji)抗體（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）

7. 辣(la)根(gen)過(guo)氧化物酶(mei)標記(ji)親(qin)和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）

6. 底物溶(rong)液(ye)（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。 

7. 濃(nong)洗滌液(ye)（Wash Buffer）：1×30ml/瓶，使(shi)用(yong)時(shi)每(mei)瓶(ping)用(yong)蒸(zheng)餾水稀(xi)釋(shi)25倍(bei)。 

8. 終止液(ye)（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）

實(shi)驗(yan)原理(li)

用(yong)純化的抗體包被(bei)微孔(kong)板(ban)，制(zhi)成固(gu)相載體，往包被(bei)抗C3抗體的微孔(kong)中依次(ci)加(jia)入標本或標準品(pin)、生物(wu)素(su)化的抗C3抗體、HRP標記(ji)的親(qin)和(he)素，經(jing)過(guo)*洗滌後(hou)用(yong)底物TMB顯色(se)。TMB在(zai)過(guo)氧化物酶(mei)的催化下轉(zhuan)化成藍(lan)色(se)，並在(zai)酸(suan)的作(zuo)用(yong)下(xia)轉(zhuan)化成zui終的黃(huang)色(se)。顏色(se)的深(shen)淺和(he)樣品(pin)中的C3呈正相關(guan)。用(yong)酶(mei)標儀在(zai)450nm波(bo)長(chang)下(xia)測(ce)定吸(xi)光度(du)(OD值(zhi))，計(ji)算(suan)樣品(pin)濃(nong)度。

標本的采集及(ji)保存(cun)

1. 血清(qing)：全血標本請於室溫(wen)放(fang)置2小(xiao)時(shi)或(huo)4℃過(guo)夜後(hou)於1000 x g離心20分(fen)鐘(zhong)，取上清(qing)即可(ke)檢測，或將(jiang)標本放(fang)於-20℃或-80℃保存，但(dan)應避免反復(fu)凍融(rong)。

2. 血漿(jiang)：可(ke)用(yong)EDTA或(huo)肝素作(zuo)為抗凝(ning)劑(ji)，標本采集後(hou)30分(fen)鐘(zhong)內(nei)於2 - 8° C 1000 x g離心15分(fen)鐘(zhong)，或(huo)將(jiang)標本放(fang)於-20℃或-80℃保存，但(dan)應避免反復(fu)凍融(rong)。

3. 細(xi)胞培(pei)養(yang)物上(shang)清(qing)或其它生物(wu)標本：請1000 x g離心20分(fen)鐘(zhong)，取上清(qing)即可(ke)檢測，或將(jiang)標本放(fang)於-20℃或-80℃保存，但(dan)應避免反復(fu)凍融(rong)。

4. 樣本處理(li)：血清(qing)或血漿(jiang)標本推(tui)薦稀(xi)釋(shi)10,000倍(bei)。

註(zhu)：以上標本置4℃保存應小(xiao)於1周，-20℃或-80℃均(jun)應密封(feng)保(bao)存，-20℃不應超(chao)過(guo)1個月(yue)，-80℃不應超(chao)過(guo)2個月(yue)；標本溶血會影響(xiang)zui後(hou)檢測結果，因(yin)此溶血標本不宜進(jin)行此項檢(jian)測。

實(shi)驗(yan)原理(li)-大(da)鼠白細胞介素13ELISA檢(jian)測試(shi)劑(ji)盒(he)

ELISA試劑(ji)盒(he)操作(zuo)註(zhu)意(yi)事項：

1）試(shi)劑(ji)應按標簽說(shuo)明(ming)書儲(chu)存，使(shi)用(yong)前恢(hui)復(fu)到(dao)室(shi)溫(wen)。稀(xi)稀(xi)過(guo)後的標準品(pin)應丟棄，不可(ke)保存。

2）實(shi)驗(yan)中不用(yong)的板(ban)條(tiao)應立(li)即放(fang)回包(bao)裝(zhuang)袋(dai)中，密封(feng)保(bao)存，以免變(bian)質(zhi)。

3）不用(yong)的其它試劑(ji)應包裝好(hao)或蓋(gai)好(hao)。不同(tong)批號(hao)的試(shi)劑(ji)不要(yao)混用(yong)。保(bao)質(zhi)前使(shi)用(yong)。

4）使(shi)用(yong)壹(yi)次(ci)性(xing)的吸(xi)頭(tou)以免交(jiao)叉汙染(ran)，吸(xi)取終止液(ye)和底物A、B液(ye)時，避(bi)免使(shi)用(yong)帶(dai)金(jin)屬(shu)部(bu)分(fen)的加(jia)樣器。

5）使(shi)用(yong)幹(gan)凈的塑(su)料(liao)容器配(pei)置洗滌液(ye)。使(shi)用(yong)前充(chong)分(fen)混勻試(shi)劑(ji)盒(he)裏的各(ge)種(zhong)成(cheng)份(fen)及(ji)樣品(pin)。

6）洗滌酶(mei)標板(ban)時(shi)應充(chong)分(fen)拍(pai)幹，不要(yao)將(jiang)吸(xi)水紙(zhi)直(zhi)接放(fang)入酶(mei)標反應孔(kong)中吸(xi)水。

7）底物A應揮(hui)發，避(bi)免長(chang)時間打開(kai)蓋(gai)子(zi)。底物B對(dui)光敏感，避(bi)免長(chang)時間暴(bao)露(lu)於光下(xia)。避(bi)免用(yong)手(shou)接觸，有(you)毒。實(shi)驗(yan)完(wan)成後(hou)應立(li)即讀取OD值。

8）加(jia)入試劑(ji)的順(shun)序(xu)應壹致，以保證(zheng)所(suo)有(you)反應板(ban)孔(kong)溫(wen)育的時(shi)間壹樣。

9）按(an)照說(shuo)明(ming)書中標明(ming)的時(shi)間、加(jia)液(ye)的量及(ji)順序(xu)進(jin)行溫(wen)育操作(zuo)