妳(ni)知(zhi)道(dao)影響(xiang)ELISA試(shi)劑盒(he)的因素(su)有(you)哪些嗎？

　　ELISA即(ji)酶(mei)聯(lian)免疫吸附(fu)法(fa)，是壹(yi)種(zhong)常用(yong)的固相(xiang)酶(mei)免疫測(ce)定(ding)方法(fa)。 由(you)於(yu)ELISA方法(fa)簡單(dan)，方(fang)便(bian)，靈敏，特(te)異性(xing)強且(qie)不需(xu)要特(te)殊(shu)設(she)備(bei)(只(zhi)需(xu)要酶(mei)標儀(yi)就可(ke)以)，所(suo)以被廣(guang)泛應(ying)用於(yu)各種(zhong)抗原和(he)抗體(ti)測(ce)定(ding)。
 

　　但(dan)是影響(xiang)ELISA測(ce)定(ding)的因素(su)有(you)很多(duo)，而(er)其(qi)操(cao)作(zuo)中(zhong)需(xu)要有(you)壹(yi)定的技術要(yao)求(qiu)，如(ru)操作(zuo)手法，環(huan)境，樣(yang)本等(deng)，有(you)時(shi)常可(ke)見到壹(yi)些錯(cuo)誤結果(即(ji)假(jia)陽(yang)性(xing)或假(jia)陰性(xing))等，小(xiao)編為大(da)家解讀ELISA檢測(ce)的影響(xiang)因(yin)素(su)之(zhi)壹(yi)-樣(yang)本的影響(xiang)
 

　　樣(yang)本的影響(xiang)有(you)哪些?
 

　　1、樣(yang)本的保存(cun)：在冰(bing)箱(xiang)中(zhong)保存(cun)過久(jiu)的標本(ben)，在(zai)間接(jie)法ELISA測(ce)定(ding)中(zhong)會導(dao)致(zhi)本底過(guo)深(shen)、會造(zao)成(cheng)假(jia)陽(yang)性(xing);為避免上述問(wen)題(ti)，在(zai)ELISA試劑盒(he)測(ce)定(ding)血(xue)清(qing)標(biao)本時(shi)最好(hao)能(neng)新(xin)鮮(xian)采集(ji);如(ru)果不能(neng)立即(ji)測(ce)定(ding)，根據相應的時間保存(cun)相應(ying)的溫度，5 d內測(ce)定的血清(qing)標(biao)本可(ke)存(cun)放於(yu)4℃，1周後(hou)測定(ding)的血清(qing)標(biao)本應(ying)-20℃低(di)溫(wen)凍(dong)存(cun);如(ru)凍存(cun)後(hou)融解(jie)的標本(ben)，蛋白質局部(bu)濃(nong)縮(suo)，分布不均(jun)，應(ying)充分混合後(hou)再測(ce)定，但(dan)混勻(yun)時應(ying)輕柔(rou)，不可(ke)強烈(lie)振蕩(dang)。
 

　　2、樣(yang)本的時間：因(yin)為塑(su)料試管(guan)能(neng)吸附(fu)抗原物質，所(suo)以樣(yang)本長(chang)時間放在(zai)塑(su)料管(guan)內(nei)會使樣(yang)本內(nei)抗原含量下降造(zao)成(cheng)假(jia)陰性(xing)。*方法(fa)是使用(yong)真空(kong)采(cai)血管(guan);並(bing)使用(yong)非抗凝(ning)標本，肝(gan)素(su)抗凝(ning)血漿會增(zeng)加OD值(zhi)，EDTA、酶(mei)抑(yi)制劑(如(ru)NaN3)可(ke)抑(yi)制ELISA系統(tong)中(zhong)辣根過(guo)氧化(hua)物酶(mei)活(huo)性(xing)。
 

　　3、樣(yang)本受(shou)細(xi)菌(jun)汙染：因(yin)菌(jun)體(ti)中(zhong)可(ke)能(neng)會含有(you)內(nei)源(yuan)性(xing)辣根過(guo)氧化(hua)物酶(mei)，因此(ci)，被細(xi)菌(jun)汙染的標本(ben)同(tong)溶血(xue)標(biao)本(ben)壹(yi)樣(yang)，可(ke)能(neng)會產(chan)生(sheng)非特異性(xing)顯色(se)而(er)幹擾測(ce)定(ding)結果。
 

　　4、樣(yang)本的凝(ning)固：樣(yang)本凝(ning)固不全。在實(shi)驗中(zhong)，有(you)的時候(hou)心急為了(le)爭取時(shi)間快速(su)檢(jian)測，ELISA試(shi)劑盒(he)在(zai)血(xue)液(ye)還未開始凝(ning)固的時候(hou)就(jiu)強行(xing)離心分離血清(qing)，導(dao)致(zhi)血清(qing)中(zhong)仍(reng)殘留(liu)部(bu)分纖(xian)維蛋白原，在ELISA測定(ding)過(guo)程中(zhong)形成(cheng)肉眼可(ke)見的纖(xian)維蛋白塊，易(yi)造(zao)成(cheng)假(jia)陽(yang)性(xing)結果;因(yin)此(ci)血(xue)液標(biao)本采(cai)集後(hou)必(bi)須使其(qi)充(chong)分凝(ning)固後(hou)再分離血清(qing)。
 

　　5、樣(yang)本溶血(xue)：溶血(xue)標(biao)本(ben)及(ji)混(hun)有(you)紅(hong)細(xi)胞(bao)的血清(qing)采(cai)用ELISA法(fa)檢測(ce)易(yi)產(chan)生(sheng)假(jia)陽(yang)性(xing)。可(ke)能(neng)是溶血(xue)血(xue)清(qing)中(zhong)含有(you)過(guo)氧(yang)化(hua)酶(mei)物質(紅(hong)細(xi)胞(bao)或血(xue)紅(hong)蛋白中(zhong)的亞鐵(tie)血(xue)紅(hong)素(su))，ELISA試劑盒(he)在(zai)洗(xi)滌(di)過程中(zhong)往(wang)往(wang)難以*洗(xi)脫(tuo)，它可(ke)使H2O2釋(shi)放出(chu)原生(sheng)態氧(yang)(O)，從(cong)而(er)催(cui)化(hua)底物四(si)甲(jia)基聯(lian)苯胺生(sheng)成可(ke)溶性(xing)的有(you)色(se)物質，即(ji)顯(xian)藍(lan)色，產(chan)生(sheng)假(jia)陽(yang)性(xing)[2]。所以嚴(yan)重(zhong)溶血(xue)標(biao)本(ben)禁(jin)用。