小(xiao)鼠胰島(dao)素(su)樣生(sheng)長因(yin)子(zi)2ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)實驗(yan)方法

小(xiao)鼠胰島(dao)素(su)樣生(sheng)長因(yin)子(zi)2ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)實驗(yan)方法

ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)
標本(ben)：血(xue)清(qing)、血漿(jiang)、細胞上清(qing)液(ye)、尿(niao)液(ye)、體(ti)液(ye)、灌洗液(ye)、腦(nao)脊(ji)髓(sui)、心(xin)房(fang)水(shui)、胸(xiong)房水(shui)、組織(zhi)等。
種屬(shu)：人、大(da)鼠、小(xiao)鼠、兔(tu)子(zi)、豬、犬(quan)、猴(hou)、馬(ma)、牛、羊(yang)、雞(ji)、鴨、魚等。
用(yong)途：科(ke)研實驗(yan)等領(ling)域科學研究(jiu)，不(bu)得用(yong)於(yu)臨(lin)床(chuang)診(zhen)斷.
特點：靈(ling)敏性高、特異性強(qiang)、重(zhong)復(fu)性好(hao).

試(shi)劑(ji)盒(he)組成(cheng)及試(shi)劑(ji)配(pei)制 
1. 酶(mei)聯(lian)板(ban)（Assay plate ）：壹塊(kuai)（96孔(kong)）。 
2. 標(biao)準品（Standard）：6瓶。
3. 生(sheng)物素(su)標記(ji)抗體稀釋(shi)液(ye)（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
4. 辣根過氧化物酶(mei)標(biao)記(ji)親(qin)和(he)素(su)稀釋(shi)液(ye) （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
5. 生(sheng)物素(su)標記(ji)抗體（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）
7. 辣根過氧化物酶(mei)標(biao)記(ji)親(qin)和(he)素(su)（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）
6. 底物溶液(ye)（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。 
7. 濃(nong)洗滌(di)液(ye)（Wash Buffer）：1×30ml/瓶，使用(yong)時每(mei)瓶用(yong)蒸餾(liu)水(shui)稀(xi)釋(shi)25倍。 
8. 終(zhong)止液(ye)（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）

實驗(yan)原(yuan)理(li)
用(yong)純化的(de)抗(kang)體(ti)包(bao)被微孔板(ban)，制成(cheng)固相載(zai)體(ti)，往包被(bei)抗C3抗(kang)體(ti)的(de)微(wei)孔(kong)中(zhong)依次加入標(biao)本(ben)或(huo)標準品、生(sheng)物素(su)化的(de)抗(kang)C3抗(kang)體(ti)、HRP標記的(de)親(qin)和(he)素(su)，經過*洗滌(di)後用(yong)底物TMB顯(xian)色。TMB在(zai)過氧化物酶(mei)的(de)催化下轉化成(cheng)藍(lan)色，並(bing)在(zai)酸(suan)的(de)作(zuo)用(yong)下轉化成(cheng)z終(zhong)的(de)黃(huang)色。顏色的(de)深淺和(he)樣品(pin)中的(de)C3呈(cheng)正相(xiang)關(guan)。用(yong)酶(mei)標(biao)儀在450nm波(bo)長(chang)下測(ce)定(ding)吸(xi)光(guang)度(OD值)，計算(suan)樣品(pin)濃(nong)度。
標(biao)本的(de)采(cai)集及保存(cun)
1. 血清(qing)：全血(xue)標本請於(yu)室(shi)溫放置(zhi)2小(xiao)時或(huo)4℃過夜(ye)後於(yu)1000 x g離(li)心(xin)20分(fen)鐘(zhong)，取上清(qing)即(ji)可(ke)檢測(ce)，或(huo)將標本(ben)放於(yu)-20℃或(huo)-80℃保存(cun)，但應(ying)避(bi)免(mian)反(fan)復(fu)凍融。
2. 血漿(jiang)：可用(yong)EDTA或(huo)肝(gan)素(su)作(zuo)為(wei)抗凝劑(ji)，標(biao)本采(cai)集後30分鐘(zhong)內(nei)於(yu)2 - 8° C 1000 x g離(li)心(xin)15分(fen)鐘(zhong)，或(huo)將標本(ben)放於(yu)-20℃或(huo)-80℃保存(cun)，但應(ying)避(bi)免(mian)反(fan)復(fu)凍融。
3. 細胞培(pei)養(yang)物上清(qing)或(huo)其它生(sheng)物標本：請1000 x g離(li)心(xin)20分(fen)鐘(zhong)，取上清(qing)即(ji)可(ke)檢測(ce)，或(huo)將標本(ben)放於(yu)-20℃或(huo)-80℃保存(cun)，但應(ying)避(bi)免(mian)反(fan)復(fu)凍融。
4. 樣本處理(li)：血清(qing)或(huo)血漿(jiang)標本(ben)推(tui)薦(jian)稀(xi)釋(shi)10,000倍。

ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)操(cao)作(zuo)註(zhu)意事(shi)項：
1）試(shi)劑(ji)應(ying)按(an)標(biao)簽說(shuo)明(ming)書儲存(cun)，使用(yong)前恢復到(dao)室(shi)溫。稀(xi)稀過後的(de)標(biao)準品應丟(diu)棄(qi)，不(bu)可保存(cun)。
2）實驗(yan)中不(bu)用(yong)的(de)板(ban)條應立(li)即(ji)放回(hui)包(bao)裝(zhuang)袋(dai)中，密(mi)封保存(cun)，以(yi)免變(bian)質(zhi)。
3）不(bu)用(yong)的(de)其(qi)它試(shi)劑(ji)應(ying)包裝(zhuang)好(hao)或(huo)蓋好(hao)。不(bu)同批號的(de)試(shi)劑(ji)不(bu)要(yao)混(hun)用(yong)。保質(zhi)前使用(yong)。
4）使用(yong)壹次性的(de)吸(xi)頭以(yi)免交叉汙(wu)染，吸(xi)取終(zhong)止液(ye)和(he)底物A、B液(ye)時(shi)，避(bi)免(mian)使用(yong)帶金屬部分的(de)加樣器。
5）使用(yong)幹凈(jing)的(de)塑料容(rong)器(qi)配(pei)置洗滌(di)液(ye)。使用(yong)前充(chong)分(fen)混(hun)勻試(shi)劑(ji)盒(he)裏(li)的(de)各(ge)種(zhong)成(cheng)份(fen)及樣品(pin)。
6）洗滌(di)酶(mei)標(biao)板(ban)時應充(chong)分(fen)拍幹(gan)，不(bu)要(yao)將吸(xi)水(shui)紙(zhi)直接放入酶(mei)標(biao)反(fan)應(ying)孔(kong)中(zhong)吸(xi)水(shui)。
7）底(di)物A應揮發，避(bi)免(mian)長(chang)時(shi)間打開蓋子(zi)。底(di)物B對光(guang)敏感(gan)，避(bi)免(mian)長(chang)時(shi)間暴露(lu)於(yu)光(guang)下。避(bi)免(mian)用(yong)手(shou)接觸(chu)，有毒。實驗(yan)完成(cheng)後應立(li)即(ji)讀(du)取OD值(zhi)。
8）加入試(shi)劑(ji)的(de)順(shun)序(xu)應壹(yi)致(zhi)，以(yi)保證(zheng)所(suo)有反應(ying)板(ban)孔溫育(yu)的(de)時(shi)間(jian)壹(yi)樣。
9）按(an)照(zhao)說(shuo)明(ming)書中(zhong)標(biao)明(ming)的(de)時(shi)間(jian)、加液(ye)的(de)量及順(shun)序(xu)進(jin)行溫(wen)育(yu)操(cao)作(zuo)