人(ren)可(ke)溶(rong)性(xing)OX40配體(ti)ELISA試(shi)劑(ji)盒操作程序(xu)

人(ren)可(ke)溶(rong)性(xing)OX40配體(ti)ELISA試(shi)劑(ji)盒操作程序(xu)

ELISA試(shi)劑(ji)盒
標本(ben)：血清、血漿(jiang)、細胞上(shang)清液、尿(niao)液(ye)、體液、灌洗液(ye)、腦(nao)脊(ji)髓(sui)、心房(fang)水、胸房(fang)水、組織(zhi)等(deng)。
種屬(shu)：人(ren)、大(da)鼠、小(xiao)鼠、兔子、豬、犬、猴、馬、牛(niu)、羊、雞、鴨、魚(yu)等。
用途：科(ke)研實驗等(deng)領域(yu)科(ke)學(xue)研究(jiu)，不(bu)得用於(yu)臨床(chuang)診(zhen)斷(duan).
特(te)點(dian)：靈(ling)敏(min)性(xing)高、特(te)異性(xing)強、重(zhong)復(fu)性(xing)好.
 

試(shi)劑(ji)盒組成(cheng)及試(shi)劑(ji)配制(zhi) 
1. 酶聯板（Assay plate ）：壹塊(kuai)（96孔）。 
2. 標準品（Standard）：6瓶。
3. 生物(wu)素(su)標記抗(kang)體(ti)稀釋(shi)液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶(ping)。
4. 辣(la)根(gen)過(guo)氧化物酶標記親(qin)和素(su)稀釋(shi)液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶(ping)。
5. 生(sheng)物(wu)素(su)標記抗(kang)體(ti)（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）
7. 辣根(gen)過(guo)氧化物酶標記親(qin)和素(su)（HRP-avidin）：1×120μl/瓶(ping)（1：100）
6. 底物溶(rong)液(ye)（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。 
7. 濃洗滌(di)液（Wash Buffer）：1×30ml/瓶(ping)，使(shi)用時每(mei)瓶用蒸(zheng)餾(liu)水稀釋(shi)25倍。 
8. 終止液（Stop Solution）：1×10ml/瓶(ping)（2N H2SO4）

實驗原(yuan)理
用純(chun)化的抗(kang)體(ti)包被微孔(kong)板，制(zhi)成(cheng)固相載(zai)體，往包(bao)被(bei)抗(kang)C3抗(kang)體(ti)的微孔(kong)中依次(ci)加入(ru)標本(ben)或標準品、生物素(su)化(hua)的抗(kang)C3抗(kang)體(ti)、HRP標記的親(qin)和素(su)，經過(guo)*洗滌(di)後用底物TMB顯(xian)色(se)。TMB在(zai)過(guo)氧化物酶的催化下轉(zhuan)化成(cheng)藍(lan)色(se)，並在酸(suan)的作用下轉(zhuan)化成(cheng)z終的黃色。顏(yan)色(se)的深淺(qian)和樣(yang)品中的C3呈正相關。用酶標儀(yi)在(zai)450nm波長下測(ce)定吸(xi)光度(du)(OD值)，計算(suan)樣(yang)品濃度(du)。
標本(ben)的采(cai)集及保存
1. 血(xue)清：全血標本(ben)請於(yu)室溫(wen)放置2小(xiao)時或4℃過(guo)夜(ye)後於(yu)1000 x g離心20分(fen)鐘，取上清即(ji)可檢測(ce)，或將標本(ben)放於(yu)-20℃或-80℃保存，但(dan)應避免(mian)反(fan)復(fu)凍融(rong)。
2. 血(xue)漿：可(ke)用EDTA或肝素(su)作為(wei)抗(kang)凝(ning)劑(ji)，標本(ben)采(cai)集後30分(fen)鐘內於(yu)2 - 8° C 1000 x g離心15分(fen)鐘，或將標本(ben)放於(yu)-20℃或-80℃保存，但(dan)應避免(mian)反(fan)復(fu)凍融(rong)。
3. 細(xi)胞培養物(wu)上清或其它(ta)生物(wu)標本(ben)：請1000 x g離心20分(fen)鐘，取上清即(ji)可檢測(ce)，或將標本(ben)放於(yu)-20℃或-80℃保存，但(dan)應避免(mian)反(fan)復(fu)凍融(rong)。
4. 樣(yang)本(ben)處理：血清或血漿標本(ben)推薦稀釋(shi)10,000倍。
 

ELISA試(shi)劑(ji)盒操作註(zhu)意(yi)事項(xiang)：
1）試(shi)劑(ji)應按標簽(qian)說明書儲(chu)存，使(shi)用前恢復(fu)到室溫(wen)。稀稀過(guo)後的標準品應丟(diu)棄(qi)，不(bu)可(ke)保(bao)存。
2）實驗中不用的板條應立(li)即(ji)放回包(bao)裝(zhuang)袋(dai)中，密(mi)封保(bao)存，以免(mian)變(bian)質(zhi)。
3）不用的其它(ta)試(shi)劑(ji)應包(bao)裝(zhuang)好(hao)或蓋好(hao)。不同(tong)批(pi)號(hao)的試(shi)劑(ji)不要(yao)混用。保質(zhi)前使用。
4）使用壹次(ci)性(xing)的吸頭以免(mian)交叉(cha)汙(wu)染(ran)，吸取終止液和底物A、B液(ye)時，避免(mian)使(shi)用帶金屬部分的加樣(yang)器。
5）使(shi)用幹凈(jing)的塑(su)料容器配(pei)置洗滌(di)液。使(shi)用前充分(fen)混(hun)勻試(shi)劑(ji)盒裏的各種成(cheng)份(fen)及樣(yang)品。
6）洗滌(di)酶標板時應充(chong)分(fen)拍(pai)幹，不(bu)要(yao)將吸(xi)水紙直接放入(ru)酶標反(fan)應孔(kong)中吸水。
7）底物A應揮(hui)發，避免(mian)長時間(jian)打開蓋子。底物B對光敏感，避免(mian)長時間(jian)暴露(lu)於(yu)光下(xia)。避免(mian)用手(shou)接觸，有(you)毒(du)。實驗完(wan)成(cheng)後應立(li)即(ji)讀取OD值。
8）加(jia)入(ru)試(shi)劑(ji)的順序應壹(yi)致(zhi)，以保(bao)證所有反(fan)應板孔溫(wen)育的時間(jian)壹樣(yang)。
9）按照(zhao)說(shuo)明(ming)書中標明(ming)的時間(jian)、加液的量及順序進(jin)行(xing)溫(wen)育操作