雞半(ban)胱氨(an)酸蛋白(bai)酶(mei)3ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)實(shi)驗(yan)原理

雞半(ban)胱氨(an)酸蛋白(bai)酶(mei)3ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)實(shi)驗(yan)原理

ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)
標(biao)本：血清、血漿、細(xi)胞(bao)上清液、尿(niao)液(ye)、體液、灌洗(xi)液(ye)、腦脊(ji)髓、心(xin)房(fang)水、胸房水、組(zu)織(zhi)等。
種屬：人、大(da)鼠(shu)、小鼠、兔(tu)子、豬、犬(quan)、猴、馬、牛(niu)、羊、雞、鴨(ya)、魚(yu)等(deng)。
用(yong)途(tu)：科研實(shi)驗(yan)等領(ling)域(yu)科學研究(jiu)，不(bu)得用(yong)於(yu)臨(lin)床診斷.
特點：靈敏(min)性高(gao)、特(te)異(yi)性強、重復性好.

試(shi)劑(ji)盒(he)組(zu)成及試(shi)劑(ji)配(pei)制 
1. 酶(mei)聯板（Assay plate ）：壹(yi)塊(kuai)（96孔）。 
2. 標(biao)準(zhun)品（Standard）：6瓶。
3. 生(sheng)物素(su)標(biao)記(ji)抗體(ti)稀釋液(ye)（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶(ping)。
4. 辣(la)根過氧化物酶(mei)標(biao)記(ji)親(qin)和(he)素(su)稀(xi)釋液(ye) （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
5. 生(sheng)物素(su)標(biao)記(ji)抗體(ti)（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）
7. 辣(la)根過氧化物酶(mei)標(biao)記(ji)親(qin)和(he)素(su)（HRP-avidin）：1×120μl/瓶(ping)（1：100）
6. 底物溶(rong)液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶(ping)。 
7. 濃(nong)洗(xi)滌(di)液(ye)（Wash Buffer）：1×30ml/瓶(ping)，使用時(shi)每(mei)瓶用(yong)蒸餾(liu)水稀釋(shi)25倍。 
8. 終止(zhi)液(ye)（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）

實驗(yan)原理
用(yong)純(chun)化的(de)抗體包被微(wei)孔(kong)板(ban)，制成固相(xiang)載(zai)體，往(wang)包被抗(kang)C3抗(kang)體(ti)的(de)微孔中(zhong)依(yi)次(ci)加入標(biao)本或(huo)標(biao)準(zhun)品、生(sheng)物素(su)化(hua)的(de)抗C3抗體(ti)、HRP標(biao)記(ji)的(de)親(qin)和(he)素(su)，經(jing)過*洗(xi)滌(di)後用(yong)底物TMB顯(xian)色(se)。TMB在(zai)過氧化物酶(mei)的(de)催化(hua)下(xia)轉化成(cheng)藍(lan)色(se)，並在(zai)酸的(de)作用下(xia)轉化成(cheng)z終的(de)黃色(se)。顏色(se)的(de)深淺(qian)和(he)樣品中的(de)C3呈(cheng)正相(xiang)關(guan)。用酶(mei)標(biao)儀在(zai)450nm波(bo)長下測定吸(xi)光度(du)(OD值)，計算樣品濃(nong)度(du)。
標(biao)本的(de)采(cai)集及保(bao)存
1. 血(xue)清：全血標(biao)本請於室(shi)溫放置(zhi)2小(xiao)時或(huo)4℃過夜後於(yu)1000 x g離(li)心20分(fen)鐘，取上清即可檢(jian)測，或(huo)將(jiang)標(biao)本放於(yu)-20℃或(huo)-80℃保(bao)存，但(dan)應避(bi)免反復凍(dong)融(rong)。
2. 血(xue)漿：可用(yong)EDTA或(huo)肝(gan)素(su)作(zuo)為(wei)抗凝(ning)劑(ji)，標(biao)本采(cai)集後30分(fen)鐘內於(yu)2 - 8° C 1000 x g離心(xin)15分(fen)鐘，或(huo)將(jiang)標(biao)本放於(yu)-20℃或(huo)-80℃保(bao)存，但(dan)應避(bi)免反復凍(dong)融(rong)。
3. 細(xi)胞(bao)培養(yang)物上清或(huo)其它生(sheng)物標(biao)本：請1000 x g離心(xin)20分(fen)鐘，取上清即可檢(jian)測，或(huo)將(jiang)標(biao)本放於(yu)-20℃或(huo)-80℃保(bao)存，但(dan)應避(bi)免反復凍(dong)融(rong)。
4. 樣(yang)本處理(li)：血(xue)清或(huo)血漿標(biao)本推(tui)薦(jian)稀釋10,000倍。
 

ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)操(cao)作(zuo)註意(yi)事(shi)項：
1）試(shi)劑(ji)應(ying)按(an)標(biao)簽說(shuo)明書儲(chu)存(cun)，使用前(qian)恢(hui)復到(dao)室(shi)溫。稀稀(xi)過後的(de)標(biao)準(zhun)品應丟(diu)棄(qi)，不可(ke)保(bao)存。
2）實(shi)驗(yan)中不(bu)用的(de)板條應(ying)立(li)即放回(hui)包裝(zhuang)袋中，密(mi)封保(bao)存，以(yi)免變(bian)質(zhi)。
3）不(bu)用(yong)的(de)其它試(shi)劑(ji)應(ying)包裝(zhuang)好或(huo)蓋(gai)好(hao)。不(bu)同批(pi)號(hao)的(de)試(shi)劑(ji)不(bu)要(yao)混(hun)用(yong)。保(bao)質(zhi)前(qian)使用。
4）使用壹(yi)次(ci)性的(de)吸(xi)頭以(yi)免(mian)交叉(cha)汙染，吸(xi)取終(zhong)止(zhi)液(ye)和(he)底物A、B液(ye)時，避(bi)免使用帶(dai)金(jin)屬部(bu)分(fen)的(de)加樣器。
5）使用幹(gan)凈(jing)的(de)塑料容(rong)器配(pei)置(zhi)洗(xi)滌(di)液(ye)。使用前(qian)充(chong)分混(hun)勻(yun)試(shi)劑(ji)盒(he)裏(li)的(de)各種成份及樣(yang)品。
6）洗(xi)滌(di)酶(mei)標(biao)板時應充(chong)分(fen)拍幹(gan)，不(bu)要(yao)將(jiang)吸(xi)水紙直接(jie)放入酶(mei)標(biao)反應孔中(zhong)吸(xi)水。
7）底物A應(ying)揮發(fa)，避免(mian)長時間打開蓋(gai)子。底物B對(dui)光敏(min)感(gan)，避免長時間暴露(lu)於(yu)光下。避(bi)免用(yong)手(shou)接(jie)觸(chu)，有毒。實驗(yan)完成後應(ying)立(li)即讀取OD值(zhi)。
8）加(jia)入試(shi)劑(ji)的(de)順(shun)序應壹(yi)致(zhi)，以保(bao)證所有反應板孔(kong)溫育的(de)時間壹樣(yang)。
9）按(an)照說明(ming)書中標(biao)明的(de)時間、加液(ye)的(de)量(liang)及順(shun)序進行溫育操(cao)作(zuo)