大鼠(shu)細胞周期素D2ELISA試劑盒實(shi)驗(yan)原(yuan)理

大鼠(shu)細胞周期素D2ELISA試劑盒實(shi)驗(yan)原(yuan)理

Elisa試劑盒 性能:

 1．準(zhun)確(que)性：標(biao)準(zhun)品(pin)線性回(hui)歸(gui)與預期濃(nong)度(du)相(xiang)關系數R值(zhi)，大於(yu)等於(yu)0.9900。

 2．靈(ling)敏(min)度(du)：z低(di)檢測(ce)濃度(du)小(xiao)於(yu)10 pg/ml。

 3．特(te)異(yi)性：不(bu)與其(qi)它(ta)可(ke)溶(rong)性結構(gou)類似(si)物交(jiao)叉反應(ying)。

 4．重復(fu)性：板內、板間(jian)變(bian)異(yi)系數(shu)均(jun)小於(yu)15%。

樣(yang)本處理及(ji)要(yao)求(qiu)

1.  血清(qing)：將(jiang)收(shou)集(ji)於(yu)血清(qing)分(fen)離管的(de)全(quan)血(xue)標(biao)本(ben)在室溫放置2小時或(huo)4℃過(guo)夜(ye)，然後1000×g離心(xin)20 分鐘(zhong)，取上清(qing)即(ji)可(ke)，或(huo)將(jiang)上(shang)清(qing)置於(yu)-20℃或(huo)-80℃保存，但(dan)應避免反復(fu)凍融。
2.  血漿：用(yong)EDTA或(huo)肝(gan)素作(zuo)為(wei)抗(kang)凝劑采(cai)集(ji)標(biao)本(ben)，並(bing)將(jiang)標(biao)本(ben)在采集(ji)後的(de)30分鐘(zhong)內於(yu)2-8℃ 1000×g離心(xin)15分鐘(zhong)，取上清(qing)即(ji)可(ke)檢測(ce)，或(huo)將(jiang)上(shang)清(qing)置於(yu)-20℃或(huo)-80℃保存，但(dan)應避免反復(fu)凍融。
3.  組(zu)織(zhi)勻(yun)漿：用(yong)預冷(leng)的(de)PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗(xi)組(zu)織(zhi)，去除(chu)殘(can)留(liu)血液(ye)（勻漿中(zhong)裂解(jie)的(de)紅(hong)細胞會影(ying)響(xiang)測量結果），稱重(zhong)後將(jiang)組(zu)織(zhi)剪碎。將(jiang)剪碎的(de)組(zu)織(zhi)與對(dui)應(ying)體(ti)積(ji)的(de)PBS（壹般(ban)按1:9的(de)重量體(ti)積(ji)比(bi)，比(bi)如1g的(de)組(zu)織(zhi)樣(yang)品(pin)對(dui)應(ying)9mL的(de)PBS，具體(ti)體(ti)積(ji)可(ke)根據(ju)實驗需(xu)要(yao)適(shi)當(dang)調整(zheng)，並(bing)做好(hao)記錄(lu)。推薦(jian)在PBS中(zhong)加(jia)入(ru)蛋(dan)白(bai)酶抑(yi)制(zhi)劑）加(jia)入(ru)玻(bo)璃(li)勻漿器中(zhong)，於(yu)冰上充分(fen)研磨。為(wei)了進(jin)壹步(bu)裂解(jie)組(zu)織(zhi)細胞，可(ke)以對(dui)勻(yun)漿液(ye)進行超(chao)聲(sheng)破(po)碎，或(huo)反復(fu)凍融。後將(jiang)勻(yun)漿液(ye)於(yu)5000×g離心(xin)5~10分鐘(zhong)，取上清(qing)檢測(ce)。

4.  細胞培養(yang)物上(shang)清(qing)或(huo)其(qi)它(ta)生(sheng)物(wu)標(biao)本(ben)：請(qing)1000×g離心(xin)20分鐘(zhong)，取上清(qing)即(ji)可(ke)檢測(ce)，或(huo)將(jiang)上(shang)清(qing)置於(yu)-20℃或(huo)-80℃保存，但(dan)應避免反復(fu)凍融。

註：標(biao)本(ben)溶血會影(ying)響(xiang)後檢測(ce)結果，因(yin)此(ci)溶血標(biao)本(ben)不(bu)宜(yi)進行(xing)此項(xiang)檢測(ce)。

【樣本收集(ji)保存】

　　1、血清(qing)：使(shi)用(yong)不(bu)含(han)熱原(yuan)和內毒素的(de)試管，操(cao)作(zuo)過(guo)程(cheng)中(zhong)避免任(ren)何(he)細胞刺(ci)激，收集(ji)血液(ye)後，3000轉離心(xin)10分鐘(zhong)將(jiang)血(xue)清(qing)和(he)紅(hong)細胞迅速小心(xin)地分(fen)離。

　　2、血漿：EDTA、檸檬(meng)酸鹽或(huo)肝(gan)素抗(kang)凝。3000轉離心(xin)30分鐘(zhong)取上清(qing)。

　　3、細胞上清(qing)液(ye)：3000轉離心(xin)10分鐘(zhong)去除(chu)顆(ke)粒(li)和聚合(he)物。

　　4、組(zu)織(zhi)勻(yun)漿：將(jiang)組(zu)織(zhi)加(jia)入(ru)適(shi)量生(sheng)理鹽水搗碎。3000轉離心(xin)10分鐘(zhong)取上清(qing)。

　　5、保存：如果樣本(ben)收(shou)集(ji)後不(bu)及(ji)時(shi)檢測(ce)，請按壹次用量分裝，凍存(cun)於(yu)-20℃，避免反復(fu)凍融，在室溫下解(jie)凍(dong)並(bing)確保樣品(pin)均(jun)勻地(di)充分(fen)解(jie)凍(dong)。