豬乳(ru)酸脫氫(qing)酶(mei)ELISA試劑(ji)盒操作程序(xu)

豬乳(ru)酸脫氫(qing)酶(mei)ELISA試劑(ji)盒操作程序(xu)

樣(yang)本處(chu)理(li)及(ji)要求(qiu)

1.  血(xue)清：將(jiang)收集於(yu)血(xue)清分(fen)離(li)管的全血(xue)標本在(zai)室(shi)溫放置2小(xiao)時或(huo)4℃過(guo)夜(ye)，然(ran)後1000×g離(li)心20 分(fen)鐘，取上(shang)清即(ji)可，或(huo)將上(shang)清置(zhi)於(yu)-20℃或(huo)-80℃保(bao)存，但應(ying)避免反(fan)復(fu)凍融(rong)。
2.  血(xue)漿：用(yong)EDTA或(huo)肝素(su)作為抗(kang)凝劑(ji)采集標本，並將標本在(zai)采集後的30分(fen)鐘內(nei)於(yu)2-8℃ 1000×g離(li)心15分(fen)鐘，取上(shang)清即(ji)可檢測(ce)，或(huo)將上(shang)清置(zhi)於(yu)-20℃或(huo)-80℃保(bao)存，但應(ying)避免反(fan)復(fu)凍融(rong)。
3.  組(zu)織勻(yun)漿(jiang)：用(yong)預(yu)冷(leng)的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗(xi)組織(zhi)，去(qu)除(chu)殘(can)留(liu)血(xue)液（勻(yun)漿中裂解的紅(hong)細(xi)胞會影(ying)響(xiang)測量結果(guo)），稱重(zhong)後將組織(zhi)剪碎。將剪(jian)碎的組(zu)織(zhi)與對(dui)應體(ti)積(ji)的PBS（壹般按1:9的重(zhong)量體積(ji)比，比如1g的組(zu)織(zhi)樣品(pin)對(dui)應9mL的PBS，具(ju)體體(ti)積(ji)可根據(ju)實驗(yan)需(xu)要適當(dang)調(tiao)整(zheng)，並做好(hao)記錄(lu)。推薦(jian)在PBS中加入蛋(dan)白酶(mei)抑制劑(ji)）加入玻(bo)璃勻(yun)漿(jiang)器(qi)中，於(yu)冰上(shang)充(chong)分(fen)研(yan)磨(mo)。為(wei)了(le)進壹步裂(lie)解組(zu)織細(xi)胞，可以(yi)對(dui)勻漿(jiang)液進行(xing)超(chao)聲破碎，或(huo)反(fan)復(fu)凍融(rong)。*後將勻漿(jiang)液於(yu)5000×g離(li)心5~10分(fen)鐘，取上(shang)清檢(jian)測(ce)。

4.  細(xi)胞培養物(wu)上清或(huo)其它(ta)生物(wu)標本：請(qing)1000×g離(li)心20分(fen)鐘，取上(shang)清即(ji)可檢測(ce)，或(huo)將上(shang)清置(zhi)於(yu)-20℃或(huo)-80℃保(bao)存，但應(ying)避免反(fan)復(fu)凍融(rong)。

豬乳(ru)酸脫氫(qing)酶(mei)ELISA試劑(ji)盒操作程序(xu)

需(xu)要而(er)未(wei)提(ti)供(gong)的試(shi)劑(ji)和器(qi)材(cai)

1. 酶(mei)標儀(yi)（450nm）

2. 高精度加樣器及(ji)槍(qiang)頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒(heng)溫箱

4. 蒸(zheng)餾水或(huo)去(qu)離(li)子(zi)水(shui)

實(shi)驗結(jie)果(guo)計(ji)算

以(yi)所測(ce)標準品(pin)的OD值為橫坐(zuo)標，標準品(pin)的濃度值為縱坐(zuo)標，在(zai)坐(zuo)標紙(zhi)上(shang)或(huo)用(yong)相(xiang)關(guan)軟件繪制標準曲(qu)線，並得到(dao)直(zhi)線回歸(gui)方(fang)程(cheng)，將(jiang)樣品(pin)的OD值代入方(fang)程(cheng)，計(ji)算出樣(yang)品的濃度。

1. 試(shi)劑盒從(cong)冷(leng)藏(zang)環(huan)境中取出應(ying)在室(shi)溫平(ping)衡(heng)15-30 分(fen)鐘後方(fang)可使用(yong)，酶(mei)標包被(bei)板(ban)開(kai)封後如未(wei)用(yong)完(wan)，板(ban)條(tiao)應裝入密(mi)封袋(dai)中保(bao)存。

2. 濃洗(xi)滌液(ye)可能會有結晶(jing)析(xi)出，稀釋(shi)時(shi)可在水(shui)浴(yu)中加溫助溶，洗(xi)滌時(shi)不影(ying)響(xiang)結果(guo)。

3. 各步加樣均應使用(yong)加樣器，並經常校(xiao)對(dui)其準確(que)性，以(yi)避免試(shi)驗誤(wu)差(cha)。壹次加樣時間(jian)控(kong)制在(zai)5 分(fen)鐘內，如標本數(shu)量多，推薦使(shi)用(yong)排(pai)槍(qiang)加樣。

4. 請每(mei)次測定(ding)的同(tong)時(shi)做標準曲(qu)線，建(jian)議做(zuo)復孔(kong)。如標本中待測物(wu)質含量過(guo)高（樣本OD 值大於(yu)標準品(pin)孔(kong)di壹孔(kong)的OD 值），請先(xian)用(yong)樣(yang)品稀釋(shi)液(ye)稀釋(shi)壹定倍數(shu)（n 倍）後再(zai)測(ce)定(ding)，計(ji)算時(shi)請z後乘以(yi)總(zong)稀釋(shi)倍(bei)數(shu)（×n×5）。

5. 封板(ban)膜(mo)只(zhi)限壹次性使(shi)用(yong)，以(yi)避免交(jiao)叉(cha)汙染。

6. 底物(wu)請避光保(bao)存。

7. 嚴格按(an)照(zhao)說(shuo)明書的操作進行(xing)，試(shi)驗(yan)結果(guo)判定必(bi)須以(yi)酶(mei)標儀(yi)讀(du)數(shu)為準.

8. 所有樣品(pin)，洗(xi)滌液(ye)和各(ge)種(zhong)廢棄(qi)物(wu)都應按(an)傳(chuan)染物(wu)處(chu)理(li)。

9. 本試(shi)劑不(bu)同(tong)批(pi)號(hao)組(zu)分(fen)不得(de)混用(yong)。

10. 試(shi)劑盒2-8℃冷(leng)藏，保(bao)質(zhi)期(qi)6個月