牛肝細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)因子ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)操作(zuo)步(bu)驟

牛肝細(xi)胞(bao)生(sheng)長(chang)因子ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)操作(zuo)步(bu)驟

樣(yang)本(ben)處(chu)理及要求

1.  血(xue)清(qing)：將(jiang)收(shou)集於血(xue)清(qing)分(fen)離(li)管的全血(xue)標本(ben)在(zai)室(shi)溫放(fang)置2小(xiao)時或4℃過(guo)夜，然(ran)後(hou)1000×g離心(xin)20 分(fen)鐘(zhong)，取上清(qing)即(ji)可，或將(jiang)上清(qing)置於-20℃或-80℃保存(cun)，但(dan)應(ying)避(bi)免(mian)反復(fu)凍融(rong)。
2.  血(xue)漿：用(yong)EDTA或肝素(su)作(zuo)為抗(kang)凝劑采集標本(ben)，並(bing)將(jiang)標本(ben)在(zai)采(cai)集後的(de)30分(fen)鐘(zhong)內於(yu)2-8℃ 1000×g離心15分(fen)鐘(zhong)，取上清(qing)即(ji)可檢測(ce)，或將(jiang)上清(qing)置於-20℃或-80℃保存(cun)，但(dan)應(ying)避(bi)免(mian)反復(fu)凍融(rong)。
3.  組織勻(yun)漿(jiang)：用(yong)預(yu)冷(leng)的PBS (0.01M, pH=7.4)沖(chong)洗(xi)組織，去(qu)除殘留血(xue)液(ye)（勻(yun)漿(jiang)中(zhong)裂解的紅細(xi)胞(bao)會(hui)影(ying)響(xiang)測量(liang)結果(guo)），稱重(zhong)後(hou)將(jiang)組織剪碎。將(jiang)剪碎的組織與對(dui)應(ying)體(ti)積(ji)的PBS（壹(yi)般(ban)按(an)1:9的(de)重量體(ti)積(ji)比，比如1g的(de)組織樣(yang)品(pin)對(dui)應(ying)9mL的PBS，具(ju)體(ti)體積(ji)可根據實(shi)驗(yan)需要適(shi)當調(tiao)整，並(bing)做(zuo)好記(ji)錄(lu)。推(tui)薦(jian)在(zai)PBS中(zhong)加(jia)入(ru)蛋(dan)白酶抑制(zhi)劑）加(jia)入(ru)玻璃(li)勻漿(jiang)器(qi)中(zhong)，於(yu)冰上(shang)充分(fen)研(yan)磨。為了(le)進(jin)壹(yi)步(bu)裂解組織細(xi)胞(bao)，可以對(dui)勻(yun)漿液(ye)進(jin)行超(chao)聲破(po)碎(sui)，或反復(fu)凍融(rong)。*後將(jiang)勻漿(jiang)液(ye)於(yu)5000×g離心(xin)5~10分(fen)鐘(zhong)，取上清(qing)檢測(ce)。

4.  細(xi)胞(bao)培養物上清(qing)或其它生(sheng)物標本(ben)：請(qing)1000×g離心20分(fen)鐘(zhong)，取上清(qing)即(ji)可檢測(ce)，或將(jiang)上清(qing)置於-20℃或-80℃保存(cun)，但(dan)應(ying)避(bi)免(mian)反復(fu)凍融(rong)。

需要而未提供的(de)試(shi)劑和器(qi)材(cai)

1. 酶標儀(yi)（450nm）

2. 高(gao)精度(du)加(jia)樣器(qi)及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒(heng)溫(wen)箱

4. 蒸(zheng)餾(liu)水或去(qu)離(li)子(zi)水(shui)

實(shi)驗(yan)結果(guo)計(ji)算

以(yi)所(suo)測(ce)標(biao)準(zhun)品的OD值(zhi)為橫(heng)坐標，標(biao)準品(pin)的濃(nong)度(du)值(zhi)為縱(zong)坐標，在坐標紙(zhi)上或用相關軟(ruan)件繪(hui)制(zhi)標準曲線，並(bing)得到直線回(hui)歸(gui)方程，將(jiang)樣品(pin)的OD值(zhi)代(dai)入(ru)方程(cheng)，計(ji)算出樣(yang)品(pin)的濃度(du)。

1. 試劑(ji)盒(he)從冷(leng)藏環(huan)境中(zhong)取出應(ying)在(zai)室(shi)溫(wen)平(ping)衡15-30 分(fen)鐘(zhong)後(hou)方可使用，酶標包(bao)被(bei)板(ban)開封(feng)後如(ru)未用完(wan)，板條應(ying)裝(zhuang)入(ru)密(mi)封(feng)袋(dai)中(zhong)保(bao)存。

2. 濃(nong)洗(xi)滌液(ye)可能會(hui)有(you)結(jie)晶析(xi)出，稀(xi)釋(shi)時可在水浴中(zhong)加(jia)溫助溶，洗(xi)滌時不影(ying)響(xiang)結果(guo)。

3. 各(ge)步(bu)加(jia)樣均應(ying)使用加(jia)樣器(qi)，並(bing)經(jing)常校對(dui)其準(zhun)確性，以避(bi)免(mian)試驗(yan)誤差(cha)。壹(yi)次(ci)加(jia)樣時間控(kong)制(zhi)在5 分(fen)鐘(zhong)內，如(ru)標本(ben)數量多(duo)，推(tui)薦(jian)使用排槍加(jia)樣。

4. 請每(mei)次(ci)測定的(de)同(tong)時做標(biao)準曲線，建(jian)議做復(fu)孔(kong)。如(ru)標(biao)本(ben)中(zhong)待測(ce)物質(zhi)含(han)量過(guo)高（樣本(ben)OD 值(zhi)大(da)於(yu)標(biao)準品孔(kong)di壹(yi)孔(kong)的(de)OD 值(zhi)），請(qing)先用樣(yang)品稀(xi)釋(shi)液(ye)稀(xi)釋(shi)壹(yi)定(ding)倍(bei)數（n 倍(bei)）後(hou)再(zai)測(ce)定(ding)，計(ji)算時請z後(hou)乘以總(zong)稀(xi)釋(shi)倍(bei)數（×n×5）。

5. 封(feng)板膜(mo)只(zhi)限(xian)壹(yi)次(ci)性使用，以避(bi)免(mian)交叉(cha)汙(wu)染(ran)。

6. 底物請避(bi)光(guang)保存(cun)。

7. 嚴(yan)格(ge)按(an)照說(shuo)明書的操作(zuo)進(jin)行，試(shi)驗(yan)結果(guo)判(pan)定必須(xu)以(yi)酶(mei)標(biao)儀(yi)讀(du)數為準(zhun).

8. 所(suo)有(you)樣(yang)品(pin)，洗(xi)滌液(ye)和(he)各(ge)種廢(fei)棄(qi)物都(dou)應(ying)按(an)傳染(ran)物處(chu)理。

9. 本(ben)試(shi)劑(ji)不同(tong)批(pi)號(hao)組分(fen)不得混用(yong)。

10. 試(shi)劑盒(he)2-8℃冷藏，保(bao)質(zhi)期(qi)6個月