犬(quan)前(qian)白(bai)蛋白(bai)ELISA試劑(ji)盒操(cao)作步(bu)驟(zhou)

犬(quan)前(qian)白(bai)蛋白(bai)ELISA試劑(ji)盒操(cao)作步(bu)驟(zhou)

ELISA試劑(ji)盒
標(biao)本(ben)：血(xue)清、血漿、細胞(bao)上清(qing)液、尿液、體液、灌洗液、腦脊(ji)髓、心房(fang)水、胸房(fang)水、組(zu)織等。
種(zhong)屬(shu)：人、大(da)鼠、小鼠、兔子(zi)、豬(zhu)、犬(quan)、猴(hou)、馬(ma)、牛(niu)、羊(yang)、雞、鴨(ya)、魚(yu)等。
用(yong)途：科研(yan)實驗(yan)等領(ling)域(yu)科學研(yan)究(jiu)，不(bu)得(de)用(yong)於(yu)臨床診斷(duan).
特點：靈敏性(xing)高(gao)、特異(yi)性(xing)強(qiang)、重(zhong)復(fu)性(xing)好(hao).
 

試劑(ji)盒組(zu)成及試(shi)劑(ji)配(pei)制 
1. 酶(mei)聯板(ban)（Assay plate ）：壹塊(kuai)（96孔）。 
2. 標(biao)準(zhun)品(pin)（Standard）：6瓶。
3. 生(sheng)物(wu)素標記抗體(ti)稀(xi)釋(shi)液（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶。
4. 辣(la)根(gen)過氧(yang)化(hua)物(wu)酶(mei)標記(ji)親(qin)和(he)素稀(xi)釋(shi)液 （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶。
5. 生(sheng)物(wu)素標記抗體(ti)（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶（1：100）
7. 辣(la)根(gen)過氧(yang)化(hua)物(wu)酶(mei)標記(ji)親(qin)和(he)素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶（1：100）
6. 底物(wu)溶(rong)液（TMB Substrate）：1×10ml/瓶。 
7. 濃洗滌(di)液（Wash Buffer）：1×30ml/瓶，使(shi)用時(shi)每瓶(ping)用蒸餾水(shui)稀(xi)釋(shi)25倍(bei)。 
8. 終止(zhi)液（Stop Solution）：1×10ml/瓶（2N H2SO4）

實驗(yan)原理(li)
用(yong)純化的(de)抗體(ti)包(bao)被(bei)微孔板(ban)，制成固(gu)相載(zai)體(ti)，往(wang)包(bao)被(bei)抗(kang)C3抗(kang)體(ti)的微孔中依(yi)次(ci)加入(ru)標本(ben)或標(biao)準品(pin)、生(sheng)物(wu)素化的抗C3抗(kang)體、HRP標記的(de)親(qin)和(he)素，經過*洗滌(di)後(hou)用(yong)底物(wu)TMB顯(xian)色(se)。TMB在(zai)過氧(yang)化(hua)物(wu)酶(mei)的催化下轉化成(cheng)藍(lan)色，並在(zai)酸的(de)作用下轉化成(cheng)z終的(de)黃(huang)色。顏(yan)色的(de)深(shen)淺和(he)樣品(pin)中的C3呈正相關(guan)。用(yong)酶(mei)標儀(yi)在450nm波長(chang)下測定(ding)吸光(guang)度(OD值(zhi))，計(ji)算樣品(pin)濃度。
標本(ben)的(de)采集(ji)及保(bao)存
1. 血清(qing)：全(quan)血(xue)標(biao)本(ben)請(qing)於(yu)室溫放置(zhi)2小(xiao)時(shi)或4℃過夜後於(yu)1000 x g離心(xin)20分鐘，取(qu)上清(qing)即(ji)可檢測，或將(jiang)標本(ben)放(fang)於(yu)-20℃或-80℃保(bao)存，但應(ying)避(bi)免(mian)反復(fu)凍融(rong)。
2. 血(xue)漿：可用EDTA或肝素作為(wei)抗(kang)凝(ning)劑(ji)，標本(ben)采(cai)集(ji)後30分(fen)鐘(zhong)內(nei)於(yu)2 - 8° C 1000 x g離心(xin)15分鐘，或將(jiang)標本(ben)放(fang)於(yu)-20℃或-80℃保(bao)存，但應(ying)避(bi)免(mian)反復(fu)凍融(rong)。
3. 細胞(bao)培養物(wu)上清(qing)或其它(ta)生(sheng)物(wu)標(biao)本(ben)：請(qing)1000 x g離心20分鐘(zhong)，取(qu)上清(qing)即(ji)可檢測，或將(jiang)標本(ben)放(fang)於(yu)-20℃或-80℃保(bao)存，但應(ying)避(bi)免(mian)反復(fu)凍融(rong)。
4. 樣本(ben)處(chu)理：血清或血(xue)漿標(biao)本(ben)推(tui)薦稀(xi)釋(shi)10,000倍(bei)。
 

ELISA試劑(ji)盒操(cao)作註意(yi)事(shi)項：
1）試(shi)劑(ji)應(ying)按(an)標簽(qian)說明書(shu)儲存，使(shi)用前恢復(fu)到室溫。稀(xi)稀(xi)過後(hou)的(de)標準(zhun)品(pin)應(ying)丟(diu)棄(qi)，不(bu)可保存。
2）實驗(yan)中不(bu)用的(de)板條(tiao)應(ying)立(li)即(ji)放(fang)回包(bao)裝(zhuang)袋(dai)中，密封保存，以免(mian)變質。
3）不(bu)用的(de)其它(ta)試劑(ji)應(ying)包(bao)裝(zhuang)好(hao)或蓋(gai)好(hao)。不(bu)同批(pi)號的試劑(ji)不(bu)要(yao)混(hun)用(yong)。保(bao)質(zhi)前使(shi)用。
4）使(shi)用壹次(ci)性(xing)的(de)吸頭(tou)以免(mian)交叉汙染，吸取(qu)終(zhong)止(zhi)液和底物(wu)A、B液時(shi)，避免(mian)使(shi)用帶金(jin)屬(shu)部分的加樣器。
5）使(shi)用幹凈的塑料(liao)容(rong)器配(pei)置洗滌(di)液。使(shi)用前充(chong)分混勻試劑(ji)盒裏(li)的各種成(cheng)份及樣品(pin)。
6）洗滌(di)酶(mei)標板(ban)時(shi)應(ying)充(chong)分拍(pai)幹，不(bu)要(yao)將(jiang)吸水(shui)紙(zhi)直(zhi)接(jie)放入(ru)酶(mei)標反(fan)應(ying)孔中吸水(shui)。
7）底物(wu)A應(ying)揮發(fa)，避免(mian)長(chang)時(shi)間打開(kai)蓋(gai)子(zi)。底物(wu)B對(dui)光(guang)敏感(gan)，避免(mian)長(chang)時(shi)間暴露(lu)於(yu)光(guang)下。避(bi)免(mian)用手接(jie)觸，有毒。實驗(yan)完成(cheng)後應(ying)立(li)即(ji)讀(du)取(qu)OD值(zhi)。
8）加(jia)入試劑(ji)的順(shun)序(xu)應(ying)壹致(zhi)，以保證(zheng)所有反(fan)應(ying)板(ban)孔溫育的(de)時(shi)間壹樣。
9）按照(zhao)說明書(shu)中標明的(de)時(shi)間、加液的量(liang)及順(shun)序(xu)進(jin)行溫育操(cao)作(zuo)