小(xiao)鼠胰(yi)高(gao)血糖(tang)素(su)ELISA試(shi)劑(ji)盒分(fen)析方(fang)法

 小鼠胰(yi)高(gao)血糖(tang)素(su)ELISA試(shi)劑(ji)盒分(fen)析方(fang)法

Elisa試(shi)劑(ji)盒 性(xing)能:

 1．準(zhun)確(que)性(xing)：標準(zhun)品(pin)線(xian)性(xing)回(hui)歸(gui)與預期濃度相關(guan)系數R值(zhi)，大於等(deng)於(yu)0.9900。

 2．靈(ling)敏度：z低(di)檢(jian)測(ce)濃度小於10 pg/ml。

 3．特異性(xing)：不與其它可(ke)溶性結(jie)構類(lei)似(si)物交(jiao)叉(cha)反(fan)應(ying)。

 4．重(zhong)復性：板(ban)內(nei)、板(ban)間變(bian)異系數均(jun)小(xiao)於(yu)15%。

 貯藏：2-8℃，避(bi)光(guang)防潮(chao)保(bao)存。

 有(you)效期：6個月

樣(yang)本處理及(ji)要求(qiu)

1.  血清(qing)：將收集於血(xue)清(qing)分離管的全血標本在(zai)室溫放置(zhi)2小時或(huo)4℃過夜，然後1000×g離心20 分鐘(zhong)，取上清(qing)即(ji)可(ke)，或(huo)將上清(qing)置(zhi)於-20℃或-80℃保(bao)存，但(dan)應(ying)避(bi)免(mian)反(fan)復(fu)凍(dong)融(rong)。
2.  血漿：用EDTA或(huo)肝素作為(wei)抗凝(ning)劑(ji)采(cai)集標本，並(bing)將標本在(zai)采(cai)集後的30分鐘(zhong)內(nei)於(yu)2-8℃ 1000×g離心15分鐘(zhong)，取上清(qing)即(ji)可(ke)檢(jian)測(ce)，或(huo)將上清(qing)置(zhi)於-20℃或-80℃保(bao)存，但(dan)應(ying)避(bi)免(mian)反(fan)復(fu)凍(dong)融(rong)。
3.  組(zu)織勻漿：用預冷的PBS (0.01M, pH=7.4)沖洗組(zu)織，去除殘(can)留(liu)血(xue)液(ye)（勻漿中裂解的紅(hong)細(xi)胞會影響(xiang)測(ce)量(liang)結(jie)果(guo)），稱(cheng)重後將組(zu)織剪(jian)碎(sui)。將剪(jian)碎(sui)的組(zu)織與對應(ying)體(ti)積的PBS（壹般按1:9的重量體積比(bi)，比(bi)如(ru)1g的組(zu)織樣(yang)品(pin)對應(ying)9mL的PBS，具體體(ti)積可(ke)根據(ju)實(shi)驗需要(yao)適(shi)當調(tiao)整，並(bing)做好記錄。推(tui)薦(jian)在(zai)PBS中加入(ru)蛋(dan)白(bai)酶(mei)抑(yi)制(zhi)劑(ji)）加入(ru)玻(bo)璃(li)勻漿器(qi)中，於冰上充分(fen)研(yan)磨。為(wei)了進壹(yi)步裂(lie)解組(zu)織細(xi)胞，可(ke)以(yi)對勻漿液(ye)進行(xing)超聲(sheng)破(po)碎(sui)，或反復(fu)凍(dong)融(rong)。後將勻漿液(ye)於5000×g離心5~10分鐘(zhong)，取上清(qing)檢測(ce)。

4.  細(xi)胞培(pei)養(yang)物上清(qing)或其它生(sheng)物標本：請(qing)1000×g離心20分鐘(zhong)，取上清(qing)即(ji)可(ke)檢(jian)測(ce)，或(huo)將上清(qing)置(zhi)於-20℃或-80℃保(bao)存，但(dan)應(ying)避(bi)免(mian)反(fan)復(fu)凍(dong)融(rong)。

註：標本溶血會影響(xiang)後檢測(ce)結(jie)果(guo)，因(yin)此溶血標本不宜進行(xing)此項(xiang)檢(jian)測(ce)。

【樣本收集(ji)保(bao)存】

　　1、血清(qing)：使用不含熱(re)原和(he)內(nei)毒素(su)的試管，操作過程中避免(mian)任(ren)何細(xi)胞刺(ci)激，收集(ji)血(xue)液(ye)後，3000轉離心10分鐘(zhong)將血清(qing)和紅(hong)細(xi)胞迅(xun)速(su)小心地分離。

　　2、血漿：EDTA、檸檬(meng)酸鹽(yan)或肝素抗凝(ning)。3000轉離心30分鐘(zhong)取上清(qing)。

　　3、細(xi)胞上清(qing)液(ye)：3000轉離心10分鐘(zhong)去除顆(ke)粒和聚(ju)合物(wu)。

　　4、組(zu)織勻漿：將組(zu)織加(jia)入(ru)適(shi)量生理鹽(yan)水搗(dao)碎(sui)。3000轉離心10分鐘(zhong)取上清(qing)。

　　5、保(bao)存：如(ru)果樣(yang)本收集(ji)後不及(ji)時檢(jian)測(ce)，請(qing)按(an)壹(yi)次(ci)用量(liang)分裝(zhuang)，凍(dong)存於(yu)-20℃，避(bi)免(mian)反(fan)復(fu)凍(dong)融(rong)，在(zai)室溫下解(jie)凍(dong)並(bing)確保(bao)樣品(pin)均(jun)勻地充分(fen)解(jie)凍(dong)。