小鼠(shu)瘦(shou)素受(shou)體ELISA試劑(ji)盒操(cao)作(zuo)說(shuo)明簡便

小鼠(shu)瘦(shou)素受(shou)體ELISA試劑(ji)盒操(cao)作(zuo)說(shuo)明簡便

ELISA試劑(ji)盒
標(biao)本：血清(qing)、血漿、細胞(bao)上清(qing)液(ye)、尿(niao)液(ye)、體(ti)液(ye)、灌(guan)洗(xi)液(ye)、腦(nao)脊髓、心房(fang)水、胸房(fang)水、組(zu)織(zhi)等。
種屬(shu)：人(ren)、大(da)鼠(shu)、小鼠(shu)、兔(tu)子、豬(zhu)、犬、猴(hou)、馬、牛、羊(yang)、雞(ji)、鴨(ya)、魚等。
用(yong)途：科研實(shi)驗(yan)等領(ling)域(yu)科學研究(jiu)，不得用(yong)於臨(lin)床(chuang)診(zhen)斷.
特(te)點：靈(ling)敏(min)性高(gao)、特(te)異(yi)性強(qiang)、重(zhong)復(fu)性好(hao).

試劑(ji)盒組(zu)成(cheng)及(ji)試劑(ji)配制(zhi)
1. 酶(mei)聯(lian)板(ban)（Assay plate ）：壹塊(kuai)（96孔(kong)）。
2. 標(biao)準(zhun)品（Standard）：6瓶(ping)。
3. 生物素標(biao)記抗體稀(xi)釋(shi)液(ye)（Biotin-antibody Diluent）：1×10ml/瓶(ping)。
4. 辣(la)根(gen)過(guo)氧化(hua)物酶(mei)標(biao)記親(qin)和素稀(xi)釋(shi)液(ye) （HRP-avidin Diluent）：1×10ml/瓶(ping)。
5. 生物素標(biao)記抗體（Biotin-antibody）：1×120μl/瓶(ping)（1：100）
7. 辣(la)根(gen)過(guo)氧化(hua)物酶(mei)標(biao)記親(qin)和素（HRP-avidin）：1×120μl/瓶(ping)（1：100）
6. 底(di)物溶液(ye)（TMB Substrate）：1×10ml/瓶(ping)。
7. 濃(nong)洗(xi)滌液(ye)（Wash Buffer）：1×30ml/瓶(ping)，使(shi)用(yong)時(shi)每瓶(ping)用(yong)蒸(zheng)餾水(shui)稀(xi)釋(shi)25倍。
8. 終(zhong)止液(ye)（Stop Solution）：1×10ml/瓶(ping)（2N H2SO4）

實(shi)驗(yan)原(yuan)理(li)
用(yong)純化(hua)的(de)抗體包被(bei)微孔(kong)板(ban)，制(zhi)成(cheng)固(gu)相(xiang)載體，往包被(bei)抗C3抗體的(de)微孔(kong)中依次加入(ru)標(biao)本或標(biao)準(zhun)品、生物素化(hua)的(de)抗C3抗體、HRP標(biao)記的(de)親(qin)和素，經過(guo)*洗(xi)滌後用(yong)底(di)物TMB顯(xian)色(se)。TMB在過(guo)氧化(hua)物酶(mei)的(de)催(cui)化(hua)下(xia)轉(zhuan)化(hua)成(cheng)藍(lan)色(se)，並(bing)在酸(suan)的(de)作(zuo)用(yong)下(xia)轉(zhuan)化(hua)成(cheng)黃(huang)色(se)。顏(yan)色(se)的(de)深淺和樣品中的(de)C3呈(cheng)正(zheng)相(xiang)關(guan)。用酶(mei)標(biao)儀在450nm波長下(xia)測定(ding)吸(xi)光(guang)度(du)(OD值)，計算(suan)樣品濃(nong)度(du)。
標(biao)本的(de)采(cai)集(ji)及(ji)保(bao)存(cun)
1. 血清(qing)：全(quan)血標(biao)本請(qing)於室溫(wen)放(fang)置2小時(shi)或4℃過(guo)夜(ye)後於(yu)1000 x g離(li)心20分鐘(zhong)，取上(shang)清(qing)即可檢測，或將(jiang)標(biao)本放(fang)於(yu)-20℃或-80℃保(bao)存(cun)，但應(ying)避(bi)免反(fan)復(fu)凍(dong)融。
2. 血漿：可(ke)用(yong)EDTA或肝素(su)作(zuo)為(wei)抗凝劑(ji)，標(biao)本采(cai)集後30分(fen)鐘(zhong)內(nei)於(yu)2 - 8° C 1000 x g離(li)心(xin)15分(fen)鐘(zhong)，或將(jiang)標(biao)本放(fang)於(yu)-20℃或-80℃保(bao)存(cun)，但應(ying)避(bi)免反(fan)復(fu)凍(dong)融。
3. 細胞(bao)培養(yang)物上清(qing)或其(qi)它(ta)生物標(biao)本：請(qing)1000 x g離心(xin)20分鐘(zhong)，取上(shang)清(qing)即可檢測，或將(jiang)標(biao)本放(fang)於(yu)-20℃或-80℃保(bao)存(cun)，但應(ying)避(bi)免反(fan)復(fu)凍(dong)融。
4. 樣本處(chu)理(li)：血清(qing)或血漿標(biao)本推(tui)薦稀(xi)釋(shi)10,000倍。
註：以(yi)上標(biao)本置4℃保(bao)存(cun)應(ying)小於(yu)1周，-20℃或-80℃均應(ying)密封(feng)保(bao)存(cun)，-20℃不應(ying)超(chao)過(guo)1個(ge)月，-80℃不應(ying)超(chao)過(guo)2個(ge)月；標(biao)本溶血會影響(xiang)檢(jian)測結果(guo)，因(yin)此(ci)溶血標(biao)本不(bu)宜進(jin)行此(ci)項(xiang)檢測。

ELISA試劑(ji)盒操(cao)作(zuo)註(zhu)意(yi)事(shi)項(xiang)：
1）試劑(ji)應(ying)按(an)標(biao)簽說明書儲存(cun)，使用前(qian)恢復(fu)到(dao)室溫(wen)。稀(xi)稀(xi)過(guo)後的(de)標(biao)準(zhun)品應(ying)丟(diu)棄，不(bu)可(ke)保(bao)存(cun)。
2）實驗(yan)中不用的(de)板(ban)條(tiao)應(ying)立(li)即放(fang)回包裝袋中，密封(feng)保(bao)存(cun)，以免變質。
3）不用的(de)其(qi)它(ta)試劑(ji)應(ying)包裝好或蓋(gai)好(hao)。不(bu)同(tong)批號(hao)的(de)試劑(ji)不要混用(yong)。保(bao)質前(qian)使用(yong)。
4）使(shi)用壹次性的(de)吸(xi)頭(tou)以(yi)免交(jiao)叉汙(wu)染，吸取終(zhong)止液(ye)和底(di)物A、B液(ye)時(shi)，避(bi)免使(shi)用(yong)帶(dai)金屬(shu)部(bu)分的(de)加樣器。
5）使用(yong)幹(gan)凈的(de)塑(su)料(liao)容器配置洗(xi)滌液(ye)。使(shi)用(yong)前(qian)充分(fen)混勻(yun)試劑(ji)盒裏(li)的(de)各(ge)種成(cheng)份(fen)及(ji)樣品。
6）洗(xi)滌酶(mei)標(biao)板(ban)時(shi)應(ying)充分(fen)拍(pai)幹(gan)，不(bu)要將(jiang)吸水紙(zhi)直接(jie)放(fang)入(ru)酶(mei)標(biao)反應(ying)孔(kong)中吸水。
7）底(di)物A應(ying)揮(hui)發(fa)，避(bi)免長(chang)時(shi)間(jian)打(da)開蓋(gai)子。底(di)物B對光(guang)敏(min)感，避(bi)免長(chang)時(shi)間(jian)暴露(lu)於光(guang)下(xia)。避(bi)免用(yong)手接觸(chu)，有(you)毒。實驗(yan)完(wan)成(cheng)後應(ying)立(li)即讀取OD值。
8）加入(ru)試劑(ji)的(de)順序(xu)應(ying)壹致，以保(bao)證(zheng)所有(you)反應(ying)板(ban)孔(kong)溫(wen)育(yu)的(de)時(shi)間(jian)壹樣。
9）按(an)照(zhao)說(shuo)明書中標(biao)明的(de)時(shi)間(jian)、加液(ye)的(de)量及順序(xu)進行溫(wen)育(yu)操(cao)作(zuo)

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