豚鼠(shu)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)操(cao)作(zuo)流(liu)程(cheng)和(he)常(chang)見問題解(jie)答
豚鼠(shu)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)操(cao)作(zuo)流(liu)程(cheng)如(ru)下(xia)：
（1）待(dai)測樣品孔中(zhong)每孔加(jia)入(ru)待(dai)測樣品100μl，每種樣品設3個(ge)平(ping)行孔；設兩(liang)個陰(yin)性對照(zhao)孔，每孔加(jia)未(wei)處理(li)組的細胞(bao)裂(lie)解(jie)液(ye)100μl；另設(she)壹(yi)個(ge)空(kong)白對照(zhao)孔，加(jia)入(ru)純(chun)細(xi)胞(bao)裂(lie)解(jie)液(ye)100μl。
（2）酶標(biao)板(ban)置(zhi)4℃，包(bao)被過(guo)夜(ye)。
（3）洗板(ban)：吸(xi)幹(gan)孔內反(fan)應(ying)液(ye)，用洗滌液(ye)過(guo)洗壹(yi)遍（將洗滌液(ye)註(zhu)滿板(ban)孔後，即(ji)甩去(qu)），之(zhi)後將洗滌液(ye)註(zhu)滿板(ban)孔，浸泡(pao)1-2分鐘，間歇搖動。甩(shuai)去(qu)孔內液(ye)體後在吸(xi)水(shui)紙上拍幹。重復(fu)洗滌3-4次。
（4）陰(yin)性對照(zhao)孔每孔加(jia)入(ru)PBS 50μl，樣品孔及空(kong)白孔每孔加(jia)入(ru)1:500稀(xi)釋(shi)的兔抗人(ren)AIF抗(kang)體工作(zuo)液(ye)50μl。
（5）酶標(biao)板(ban)置(zhi)37℃培養箱(xiang)的濕盒(he)內(nei)，孵育60min。
（6）洗板(ban)，同(tong)（4）。
（7）每孔加(jia)1:5000稀(xi)釋的HRP-標記的山羊抗(kang)兔(tu)抗體工作(zuo)液(ye) 100μl。
（8）酶標(biao)板(ban)置(zhi)37℃培養箱(xiang)的濕盒(he)內(nei)，孵育60min。
（9）洗板(ban)，同(tong)（4）。
（10）每孔加(jia)TMB顯色液(ye) 100μl，輕輕(qing)混勻10s，置37℃暗(an)處反(fan)應(ying)15-20min。
（11）每孔加(jia)100μl 2mol/L H2SO4終止反應(ying)。
（12）分別測450nm 吸(xi)光(guang)值W1和(he)630nm吸(xi)光(guang)值W2，zui終測得的OD值為兩(liang)者(zhe)之(zhi)差（W1-W2），以減少由(you)容(rong)器(qi)上的劃痕或(huo)指印(yin)等造(zao)成的光幹擾(rao)。
（13）數(shu)據(ju)處理(li)：在得出(chu)標本(ben)（S）和陰(yin)性對照(zhao)（N）的 OD值後，計(ji)算(suan)S/N值(zhi)。S/N≥2.1為陽(yang)性判(pan)定標準(zhun)。
介(jie)紹壹(yi)下(xia)豚鼠(shu)ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)實驗(yan)操作的常(chang)見問題。
壹(yi)、壹(yi)次(ci)ELISA實驗(yan)需要多長(chang)時(shi)間？
雙(shuang)抗體夾心ELISA法(fa)壹(yi)次(ci)實驗(yan)需要3.5-4小時(shi)，競爭ELISA法(fa)壹(yi)次(ci)實驗(yan)需要2-2.5小時(shi)。
二、血(xue)清(qing)樣本(ben)如何(he)處理(li)？
全血(xue)標本(ben)於室(shi)溫(wen)放(fang)置(zhi)2小(xiao)時(shi)或(huo)4℃過(guo)夜(ye)後於(yu)1000×g離心20分(fen)鐘(zhong)。仔(zai)細(xi)收集(ji)上(shang)清(qing)。保存過(guo)程(cheng)中(zhong)如有(you)沈(chen)澱形成，應(ying)再次離心。
三(san)、血(xue)漿樣本(ben)如何(he)處理(li)？
建(jian)議(yi)選擇EDTA或(huo)者(zhe)檸(ning)檬酸(suan)鈉(na)作為(wei)抗凝劑(ji)，混合10-20分鐘後(hou)，於(yu)1000×g離心15分(fen)鐘(zhong)，仔(zai)細(xi)收集(ji)上(shang)清(qing)。保存過(guo)程(cheng)中(zhong)如有(you)沈(chen)澱形成，應(ying)再次離心。
四、細胞(bao)上清(qing)液(ye)樣本(ben)如何(he)處理(li)？
檢(jian)測分泌性的成份時(shi)，用無菌管收集(ji)。離心20分(fen)鐘(zhong)左(zuo)右(you)（1000×g）。仔(zai)細(xi)收集(ji)上(shang)清(qing)。
您的位置：
更(geng)新時(shi)間：2020-07-27 
瀏(liu)覽次數(shu)：2344
