ELISA檢測(ce)試劑盒(he)使(shi)用(yong)血清(qing)提(ti)取(qu)蛋(dan)白(bai)的(de)制作(zuo)辦(ban)法

　　通(tong)常(chang)提(ti)取(qu)蛋(dan)白(bai)質的(de)辦法是離心(xin)分(fen)離，除(chu)掉血漿(jiang)，使(shi)二(er)價鐵血紅(hong)素酸化(hua)，並將(jiang)其(qi)掃(sao)除(chu)。但是這種辦法產量(liang)很低(di)(100毫升(sheng)血液(ye)僅(jin)可提(ti)取(qu)蛋(dan)白(bai)質約10)克。

　　為(wei)了(le)進步(bu)蛋(dan)白(bai)質得率，選(xuan)用(yong)新(xin)的(de)辦法，即用(yong)每(mei)分(fen)鐘(zhong)2500～3000轉的(de)速(su)度(du)在15～30分(fen)鐘(zhong)內將(jiang)血液(ye)進行(xing)離心(xin)分(fen)離，使(shi)醋酸和(he)氯(lv)化(hua)鈉的(de)混(hun)合物(wu)(比(bi)值(zhi)為(wei)2∶1～4∶1)酸化(hua)。在溫(wen)度(du)90～110℃下加熱5～15分(fen)鐘(zhong)。冷卻(que)，再(zai)增加yi醚。

　　制作(zuo)辦(ban)法：

　　取經過安(an)穩的(de)血液(ye)，作(zuo)離心(xin)分(fen)離15～30分(fen)鐘(zhong)，每(mei)分(fen)鐘(zhong)轉速(su)為(wei)2500～3000轉。從(cong)而(er)獲(huo)得固形(xing)物，去(qu)除(chu)血漿(jiang)，用水使(shi)固(gu)形(xing)物沈(chen)渣(zha)溶解(jie)。置(zhi)血紅(hong)素於(yu)培(pei)養基中(zhong)。為(wei)了(le)使(shi)培(pei)養基酸(suan)化(hua)而(er)使(shi)血紅(hong)素分(fen)子中(zhong)的(de)二(er)價鐵血紅(hong)素和血球(qiu)蛋(dan)白(bai)的(de)結合體(ti)分(fen)離預先(xian)制(zhi)備(bei)好醋酸和(he)氯(lv)化(hua)鈉的(de)混(hun)合物(wu)並將(jiang)它(ta)加熱(re)到(dao)90～110℃。混(hun)合時(shi)將(jiang)固(gu)形(xing)物的(de)溶血產(chan)品緩慢地(di)增加到(dao)加熱的(de)混(hun)合物(wu)中(zhong)。從(cong)頭把(ba)溫(wen)度(du)逐漸地(di)升高到(dao)沸點，煮(zhu)沸5～15分(fen)鐘(zhong)，以便(bian)使(shi)結(jie)合體(ti)*分(fen)離，接(jie)著將(jiang)混(hun)合物(wu)逐(zhu)步(bu)冷(leng)卻到(dao)室溫(wen)。

　　為(wei)了(le)使(shi)二(er)價鐵血紅(hong)素溶解(jie)並消(xiao)除(chu)，進口(kou)ELISA檢(jian)測(ce)試劑盒(he)在混(hun)合物(wu)中(zhong)按(an)溶物(wu)產(chan)品比值(zhi)2∶1～5∶1增加yi醚。這時(shi)提(ti)取(qu)出(chu)來的(de)蛋白(bai)質呈白(bai)棉(mian)絮狀(zhuang)。將溶(rong)液(ye)過濾(lv)，再(zai)用(yong)yi醚清(qing)洗(xi)。

　　100毫升(sheng)血中(zhong)提(ti)取(qu)的(de)蛋白(bai)質產品相當於(yu)14.4克。使(shi)用(yong)這種辦法，每(mei)100毫(hao)升的(de)血液(ye)可進步(bu)蛋(dan)白(bai)質得率45。

　　根據血紅(hong)蛋白(bai)含(han)量(liang)的(de)不同，胎(tai)牛血清(qing)可表(biao)現出(chu)黃(huang)色或(huo)赤(chi)色，我(wo)國的(de)細(xi)胞(bao)培(pei)養用(yong)血清(qing)標(biao)準是不高於(yu)20mg/dl，實際上，血紅(hong)蛋白(bai)含(han)量(liang)的(de)凹(ao)凸對血清(qing)並無(wu)直(zhi)接(jie)影響(xiang)，這個(ge)指(zhi)標的(de)意義在於(yu)能體(ti)現出(chu)采(cai)血過程的(de)謹慎(shen)規範程度(du)，傑出的(de)操(cao)作(zuo)能(neng)下降(jiang)血清(qing)的(de)溶血。

　　國(guo)產血清(qing)的(de)基本(ben)上是采(cai)血後(hou)立刻離心(xin)收集，所(suo)以很少(shao)會有溶(rong)血，表(biao)現出(chu)亮(liang)堂的(de)蠟(la)黃(huang)色。進口(kou)胎(tai)牛血清(qing)或(huo)多或(huo)少總有(you)點溶(rong)血，因(yin)為(wei)胎(tai)牛血清(qing)凝(ning)血功(gong)用差，紅細(xi)胞(bao)簡(jian)單破裂(lie)。