人(ren)粒(li)細胞集(ji)落(luo)刺(ci)激(ji)因子(zi)(G-CSF)ELISA試(shi)劑盒

英(ying)文名(ming)稱(cheng)：Human G-CSF ELISA Kit
實驗類(lei)型(xing)：夾(jia)心法
檢(jian)測(ce)範圍：25 pg/mL – 800 pg/mL
低(di)檢(jian)測(ce)限(xian)：1.0 pg/mL
應(ying)用(yong)範(fan)圍：血清(qing)、血漿(jiang)、組(zu)織(zhi)勻(yun)漿(jiang)、細(xi)胞培(pei)養物上(shang)清(qing)或(huo)其它相關(guan)液(ye)體（本(ben)產(chan)品(pin)僅供實驗室科(ke)研及非(fei)臨(lin)床用(yong)途(tu)）

實驗原理(li)

試(shi)劑盒采(cai)用(yong)雙(shuang)抗體壹步夾(jia)心法酶聯(lian)免(mian)疫(yi)吸附試(shi)驗（ELISA）。往(wang)預先(xian)包被(bei)人粒(li)細胞集(ji)落(luo)刺(ci)激(ji)因子(zi)（G-CSF）捕(bu)獲(huo)抗體的包(bao)被(bei)微孔(kong)中(zhong)，依次(ci)加(jia)入標(biao)本(ben)、標(biao)準(zhun)品(pin)、HRP標(biao)記(ji)的(de)檢(jian)測(ce)抗體，經過(guo)溫(wen)育並*洗(xi)滌(di)。用(yong)底(di)物TMB顯(xian)色，TMB在(zai)過氧(yang)化物酶的(de)催(cui)化(hua)下(xia)轉化(hua)成(cheng)藍色，並在(zai)酸(suan)的作(zuo)用(yong)下(xia)轉化(hua)成(cheng)終的黃色。顏(yan)色的(de)深淺(qian)和(he)樣品中(zhong)的人粒細胞集(ji)落(luo)刺(ci)激(ji)因子(zi)（G-CSF）呈(cheng)正(zheng)相關(guan)。用(yong)酶標(biao)儀(yi)在(zai)450nm 波(bo)長(chang)下(xia)測(ce)定(ding)吸(xi)光(guang)度（OD 值），計(ji)算樣品濃度。

操(cao)作步驟(zhou)

1. 從(cong)室溫(wen)平(ping)衡(heng)20min後的鋁箔袋(dai)中(zhong)取(qu)出(chu)所需板條，剩余板條用(yong)自(zi)封(feng)袋(dai)密(mi)封(feng)放(fang)回4℃。

2. 設置(zhi)標(biao)準(zhun)品(pin)孔(kong)和(he)樣本(ben)孔(kong)，標(biao)準(zhun)品(pin)孔(kong)各(ge)加(jia)不同濃度的標(biao)準(zhun)品(pin)50μL；

3. 樣本(ben)孔(kong)中(zhong)加(jia)入待測(ce)樣本(ben)50μL；空(kong)白(bai)孔(kong)不加(jia)。

4. 除(chu)空(kong)白(bai)孔(kong)外(wai)，標(biao)準(zhun)品(pin)孔(kong)和(he)樣本(ben)孔(kong)中(zhong)每(mei)孔(kong)加(jia)入辣(la)根(gen)過(guo)氧(yang)化(hua)物酶（HRP）標(biao)記(ji)的(de)檢(jian)測(ce)抗體100μL，用(yong)封(feng)板膜封(feng)住(zhu)反應(ying)孔(kong)，37℃水浴(yu)鍋或(huo)恒(heng)溫(wen)箱溫(wen)育60min。

5. 棄(qi)去(qu)液(ye)體(ti)，吸(xi)水(shui)紙上拍(pai)幹，每(mei)孔(kong)加(jia)滿洗(xi)滌(di)液（350μL），靜(jing)置(zhi)1min，甩(shuai)去(qu)洗(xi)滌(di)液，吸(xi)水紙上(shang)拍(pai)幹，如此重復洗(xi)板5次(ci)（也可用(yong)洗(xi)板機洗(xi)板）。

6. 每(mei)孔(kong)加(jia)入底物A、B各(ge)50μL，37℃避(bi)光(guang)孵(fu)育15min。

7. 每(mei)孔(kong)加(jia)入終止液50μL，15min內，在450nm波(bo)長(chang)處測(ce)定各(ge)孔(kong)的OD值(zhi)。