昆(kun)蟲(chong)ELISA試劑盒(he)操作流(liu)程細則

昆(kun)蟲(chong)ELISA試劑盒(he)中文簡(jian)稱(cheng)：酶(mei)聯免疫(yi)法(fa)或酶免法(fa)問：什(shen)麽是種屬(shu)？什(shen)麽是樣本？答(da)：①種屬(shu)就是所(suo)謂的(de)，客(ke)戶(hu)測(ce)得(de)樣本來(lai)源是從(cong)什(shen)麽動物，植物，人，等(deng)，提(ti)取
的樣(yang)本，針(zhen)對(dui)每個種屬(shu)有(you)想對(dui)應的試(shi)劑盒(he)，例如(ru)，從(cong)人的部位(wei)，收(shou)集的(de)樣本，種屬(shu)就是人。那試劑盒(he)就是測(ce)人的什麽什麽指(zhi)標？動(dong)物的就測動(dong)物的什(shen)麽指(zhi)標等(deng)等(deng)。
②客(ke)戶(hu)從(cong)種屬(shu)身(shen)上提(ti)取的，包括(kuo)血清(qing)、血漿(jiang)、尿(niao)液、胸腹水(shui)、灌洗液、腦脊(ji)液、細胞培養(yang)上清、組織(zhi)勻漿(jiang)，唾(tuo)液等(deng)標本(ben)，（能(neng)溶的(de)壹(yi)般(ban)情況(kuang)下(xia)都可以(yi)測(ce)）
昆(kun)蟲(chong)ELISA試劑盒(he)使(shi)用說(shuo)明書(shu)操作流(liu)程如(ru)下(xia)：
（1）待測樣(yang)品(pin)孔中每(mei)孔加入待測樣(yang)品(pin)100μl，每種樣品(pin)設(she)3個平行(xing)孔；設(she)兩(liang)個陰(yin)性對(dui)照孔，每(mei)孔加未(wei)處理(li)組(zu)的細胞裂解(jie)液100μl；另設(she)壹個空白對(dui)照孔，加入純(chun)細
胞裂解(jie)液100μl。
（2）酶標(biao)板置4℃，包被(bei)過(guo)夜(ye)。
（3）洗板：吸幹孔內(nei)反應液，用洗滌液過(guo)洗壹遍(bian)（將洗滌液註滿(man)板孔後，即(ji)甩去），之後將洗滌液註滿(man)板孔，浸(jin)泡1-2分(fen)鐘(zhong)，間(jian)歇(xie)搖動(dong)。甩去孔內(nei)液體後在(zai)吸(xi)水紙
上拍(pai)幹。重(zhong)復洗滌3-4次。
（4）陰(yin)性對(dui)照孔每(mei)孔加入PBS 50μl，樣品(pin)孔及空白孔每(mei)孔加入1:500稀釋(shi)的兔(tu)抗人AIF抗體工(gong)作(zuo)液50μl。
（5）酶標(biao)板置37℃培養(yang)箱的(de)濕盒內(nei)，孵(fu)育(yu)60min。
（6）洗板，同（4）。
（7）昆(kun)蟲(chong)ELISA試劑盒(he)每孔加1:5000稀釋(shi)的HRP-標(biao)記的(de)山羊抗兔抗體工(gong)作(zuo)液 100μl。
（8）酶標(biao)板置37℃培養(yang)箱的(de)濕盒內(nei)，孵(fu)育(yu)60min。
（9）洗板，同（4）。
（10）每孔加TMB顯色液 100μl，輕(qing)輕(qing)混(hun)勻10s，置37℃暗處反應15-20min。
（11）每孔加100μl 2mol/L H2SO4終(zhong)止反應。
（12）昆(kun)蟲(chong)ELISA試劑盒(he)分(fen)別測(ce)450nm 吸(xi)光(guang)值W1和630nm吸光(guang)值W2，終測得的(de)OD值為兩(liang)者之差(cha)（W1-W2），以(yi)減(jian)少(shao)由(you)容(rong)器上的劃痕(hen)或指(zhi)印(yin)等(deng)造(zao)成(cheng)的(de)光(guang)幹擾。
（13）數據處理(li)：在(zai)得出(chu)標本(ben)（S）和陰(yin)性對(dui)照（N）的 OD值後，計(ji)算S/N值。S/N≥21為陽性判(pan)定(ding)標(biao)準。