科研(yan)ELISA試(shi)劑(ji)盒不(bu)適(shi)用(yong)於(yu)測定(ding)半(ban)抗(kang)原(yuan)及(ji)小分子(zi)單(dan)價抗(kang)原(yuan)

科研ELISA試(shi)劑(ji)盒的關鍵技(ji)術參數(shu)包括板內(nei)差異(yi)性(xing)、板間(jian)差異(yi)性(xing)、批間(jian)差異(yi)性(xing)、重復(fu)性(xing)、特(te)異性(xing)及(ji)交(jiao)叉反應性(xing)、回收率(lv)等(deng)。如(ru)果(guo)實(shi)驗(yan)君經(jing)常(chang)開(kai)展ELISA實驗(yan)，建議使用(yong)同(tong)壹廠家的試(shi)劑(ji)盒，這樣(yang)可(ke)盡量保(bao)證(zheng)數(shu)據(ju)的重復(fu)性(xing)（當然(ran)前提(ti)是實驗(yan)條件(jian)的壹致性(xing)）。對於(yu)科研(yan)用(yong)的定量ELISA試(shi)劑(ji)盒，不(bu)同(tong)的生產廠(chang)家使(shi)用(yong)的抗體(ti)對、酶以及(ji)底物(wu)、生產工(gong)藝(yi)和研發實(shi)力(li)不(bu)盡相(xiang)同(tong)，自然(ran)不(bu)同(tong)廠家試(shi)劑(ji)盒測出的數據(ju)會(hui)有(you)差(cha)異(yi)。
壹(yi)般(ban)的科研(yan)ELISA試(shi)劑(ji)盒都經(jing)過(guo)血清(qing)、血漿(jiang)和細胞培(pei)養上清液(ye)的驗(yan)證(zheng)。在(zai)選(xuan)擇(ze)試(shi)劑(ji)盒時，好要詳(xiang)細閱(yue)讀說(shuo)明(ming)書(shu)，比(bi)如血漿(jiang)樣本(ben)抗凝劑(ji)的使用(yong)是否與試(shi)劑(ji)盒兼容。另(ling)外，在(zai)某些情形下(xia)樣品中會(hui)存在幹擾因素比如溶血血漿(jiang)、高脂肪(fang)含(han)量的樣品、人抗(kang)鼠抗(kang)體(ti)（HAMA）、細胞培(pei)養上清中含(han)胎(tai)牛血清(qing)等(deng)。因此(ci)需(xu)根(gen)據(ju)樣品來選(xuan)擇(ze)試(shi)劑(ji)盒，必要時(shi)還(hai)要根(gen)據(ju)樣本(ben)來適當(dang)優(you)化(hua)。或(huo)在(zai)樣(yang)品收集(ji)前，好先閱(yue)讀壹些(xie)可(ke)靠供應商(shang)試(shi)劑(ji)盒的說(shuo)明(ming)書(shu)或(huo)直接(jie)咨詢。如果(guo)您的樣品為組織或(huo)細(xi)胞(bao)裂(lie)解物(wu)，則需(xu)要更(geng)謹(jin)慎(shen)的選(xuan)擇(ze)試(shi)劑(ji)盒。市(shi)面上大多(duo)數的商業化(hua)試(shi)劑(ji)盒沒有(you)經(jing)過(guo)多種(zhong)來源組織樣(yang)本(ben)的驗(yan)證(zheng)。這需(xu)要實(shi)驗(yan)君能(neng)理(li)解(jie)不(bu)是所有(you)試(shi)劑(ji)盒所用(yong)的抗體(ti)對，都能(neng)特(te)異的從壹(yi)堆(dui)裂(lie)解物(wu)蛋白(bai)中特(te)異檢(jian)出(chu)您(nin)的目的蛋白(bai)，還要考慮組織樣(yang)品的基質效(xiao)應等(deng)。但(dan)如(ru)果(guo)實驗(yan)君要了(le)解(jie)組織樣(yang)品的制備(bei)問題(ti)，我們(men)另(ling)起(qi)壹(yi)文(wen)來總結(jie)。
科研ELISA試(shi)劑(ji)盒技(ji)術可(ke)用(yong)於(yu)測定(ding)抗(kang)原(yuan)，也可(ke)用(yong)於(yu)測定(ding)抗(kang)體(ti)。ELISA方法中有(you)三(san)個(ge)必要的試(shi)劑(ji)：
（1）固相(xiang)的抗原(yuan)或(huo)抗(kang)體(ti)，即"免(mian)疫(yi)吸(xi)附(fu)劑(ji)"；
（2）酶標(biao)記(ji)的抗原(yuan)或(huo)抗(kang)體(ti)，稱為"結合物(wu)"；
（3）酶反應的底物(wu)。
壹般(ban)可(ke)將(jiang)科(ke)研ELISA試(shi)劑(ji)盒分為以下(xia)幾(ji)種(zhong)類(lei)型(xing)，實(shi)驗(yan)君首(shou)先需(xu)要根(gen)據(ju)自己的待檢物(wu)來確(que)定(ding)試(shi)劑(ji)盒類型(xing)。
1）科(ke)研(yan)ELISA試(shi)劑(ji)盒雙抗體(ti)夾心法(fa)：針對(dui)抗(kang)原(yuan)分(fen)子(zi)上兩個(ge)不(bu)同(tong)抗原決(jue)定(ding)簇(cu)的單克(ke)隆(long)抗(kang)體(ti)分別作(zuo)為(wei)固相(xiang)捕(bu)獲(huo)抗體(ti)和酶標檢測抗(kang)體(ti)。適用於(yu)測定(ding)二價或(huo)二價以(yi)上的大分(fen)子(zi)抗(kang)原如血漿(jiang)中的細胞(bao)因子(zi)，科(ke)研ELISA試(shi)劑(ji)盒不(bu)適(shi)用(yong)於(yu)測定(ding)半(ban)抗(kang)原(yuan)及(ji)小分子(zi)單(dan)價抗(kang)原(yuan)。同(tong)理(li)，也有(you)雙(shuang)抗(kang)原(yuan)夾心法(fa)測抗(kang)體(ti)。
2）科研ELISA試(shi)劑(ji)盒直接(jie)法：將(jiang)抗(kang)原直接(jie)固定在(zai)固相(xiang)載(zai)體(ti)上，加入(ru)酶標記的壹抗(kang)，即可(ke)測(ce)定(ding)抗原(yuan)總量。此(ci)法(fa)操(cao)作(zuo)手(shou)續(xu)簡(jian)短(duan)，因無須使(shi)用(yong)二抗可(ke)避(bi)免(mian)交(jiao)互反應。
3）間(jian)接法(fa)：間(jian)接法(fa)是檢測(ce)抗體(ti)常用的方法(fa)，其原理(li)為(wei)利用酶(mei)標記(ji)的抗抗(kang)體(ti)（抗人免(mian)疫(yi)球蛋(dan)白(bai)抗體(ti)）來檢測(ce)與固相(xiang)抗(kang)原(yuan)結(jie)合的待檢抗(kang)體(ti)。
4）科研ELISA試(shi)劑(ji)盒競爭法：小分子(zi)抗(kang)原或(huo)半(ban)抗(kang)原(yuan)因缺(que)乏可(ke)作(zuo)夾心法(fa)的兩個(ge)以上的位點，因此(ci)不(bu)能(neng)用雙(shuang)抗體(ti)夾心法(fa)進行測定，可(ke)以(yi)采(cai)用競爭(zheng)法模(mo)式(shi)。當抗(kang)原(yuan)材料(liao)中的幹擾物(wu)質不(bu)易除去(qu)，或(huo)不(bu)易得(de)到(dao)足夠(gou)的純化(hua)抗原(yuan)時(shi)，可(ke)用(yong)此(ci)法(fa)檢(jian)測(ce)特(te)異性(xing)抗體(ti)。