為什麽ELISA樣(yang)本(ben)值會(hui)低(di)於空(kong)白值呢？

做任(ren)何實驗，都(dou)不可能(neng)**，我(wo)們能做的(de)就是(shi)盡(jin)zui大的(de)努(nu)力(li)減少實驗誤(wu)差(cha)。在(zai)ELISA試劑(ji)盒(he)實驗操作(zuo)中，誤(wu)差(cha)分(fen)有系統(tong)誤(wu)差(cha)、偶(ou)然(ran)誤差(cha)、過失誤(wu)差(cha)，而壹個小(xiao)小(xiao)的(de)誤(wu)差(cha)足(zu)以能夠(gou)影響(xiang)到實驗，那(na)麽(me)怎樣(yang)才能(neng)縮小(xiao)實驗誤(wu)差(cha)呢(ne)？除了需(xu)要細(xi)心(xin)之(zhi)外(wai)，還(hai)有壹些(xie)需(xu)要重點(dian)註意的(de)地方。今天(tian)，上海(hai)恒遠(yuan)為您(nin)解(jie)析(xi)為什麽ELISA樣(yang)本(ben)值會(hui)低(di)於空(kong)白值？

*、基質(zhi)效應(ying) 
    分(fen)析(xi)中，基(ji)質(zhi)指(zhi)的(de)是(shi)樣(yang)本(ben)中被分(fen)析(xi)物(wu)之(zhi)外(wai)的(de)組(zu)分，基(ji)質常常對(dui)分(fen)析(xi)物(wu)的(de)分(fen)析(xi)過程有(you)顯(xian)著(zhu)的(de)幹(gan)擾(rao)，並影響(xiang)分析(xi)結果的(de)準(zhun)確(que)性，這些(xie)影響(xiang)和幹(gan)擾(rao)被稱(cheng)為基(ji)質(zhi)效應(ying)。ELISA試(shi)劑(ji)盒(he)在(zai)開發過程中，標準(zhun)品(pin)不能采用(yong)人或(huo)動(dong)物血清、血漿作(zuo)為標準(zhun)曲線(xian)的(de)稀釋液(ye)，只能采用(yong)其模擬物。模擬物與被測(ce)樣(yang)本(ben)在(zai)蛋(dan)白豐度(du)、復(fu)雜(za)性(xing)、pH等因素(su)都(dou)會(hui)存(cun)在(zai)差(cha)異(yi)。當樣(yang)本(ben)的(de)基(ji)質與(yu)其模擬物相比(bi)，降低(di)抗原抗體(ti)的(de)結合(he)，便(bian)產生(sheng)了(le)樣(yang)本(ben)值低(di)於空(kong)白值的(de)現(xian)象(xiang)。造成樣(yang)本(ben)值無法計(ji)算出(chu)數(shu)值，或(huo)者數(shu)值為負(fu)。
    目前(qian)zui常用(yong)的(de)去(qu)除基(ji)質效應(ying)的(de)方(fang)法是，通(tong)過已知(zhi)分析(xi)物(wu)濃(nong)度(du)的(de)標準(zhun)樣(yang)品(pin)，同時(shi)盡(jin)可能(neng)保(bao)持樣(yang)本(ben)中的(de)基(ji)質不變，建(jian)立(li)壹個校正(zheng)曲線(xian)。
    當單(dan)個樣(yang)本(ben)或(huo)少量(liang)樣(yang)本(ben)值低(di)於空(kong)白值時，可(ke)能(neng)是誤差(cha)原因，這時應(ying)增加(jia)重復(fu)，提(ti)高(gao)操作(zuo)技能(neng)。當大量(liang)樣(yang)本(ben)都(dou)低(di)於空(kong)白值時，應(ying)考慮基(ji)質(zhi)效應(ying)的(de)影響(xiang)，建(jian)立(li)校正(zheng)曲線(xian)予以(yi)修正(zheng)。

第二、實驗誤(wu)差(cha)
    誤(wu)差(cha)分(fen)為三(san)類，系(xi)統(tong)誤(wu)差(cha)、隨機誤(wu)差(cha)和過失誤(wu)差(cha)。這(zhe)三(san)類誤(wu)差(cha)中，系(xi)統(tong)誤(wu)差(cha)對(dui)樣(yang)本(ben)值和空(kong)白值之(zhi)間(jian)的(de)差(cha)異(yi)無影響(xiang)。ELISA樣(yang)本(ben)值低(di)於空(kong)白值在誤(wu)差(cha)方(fang)面主要來(lai)源(yuan)於隨機誤(wu)差(cha)和過失誤(wu)差(cha)。
    1.隨機誤(wu)差(cha) Random Error
    無法控制(zhi)的(de)變因，使測量(liang)值產生(sheng)隨機分(fen)布(bu)的(de)誤(wu)差(cha)，服從統(tong)計(ji)學(xue)上的(de)正(zheng)態(tai)分(fen)布(bu)。從統(tong)計(ji)學(xue)上來(lai)看，測量(liang)值有99%的(de)置(zhi)信限在±3SD之(zhi)間(jian)，如(ru)果CV值是20%，隨機誤(wu)差(cha)的(de)邊(bian)界(jie)就是(shi)±60%，也(ye)就是(shi)說(shuo)在CV值20%的(de)狀(zhuang)況下(xia)，樣(yang)本(ben)值低(di)於空(kong)白值60%之(zhi)內(nei)，有(you)可(ke)能(neng)是隨機誤(wu)差(cha)的(de)影響(xiang)，特別(bie)是(shi)空(kong)白值只有壹個值時。
    隨機誤(wu)差(cha)不可消(xiao)除(chu)，只能通(tong)過多(duo)次測量(liang)獲(huo)得的(de)均(jun)值盡(jin)量(liang)逼(bi)近真值。降低(di)隨機誤(wu)差(cha)的(de)解(jie)決(jue)方(fang)案1是增加(jia)空(kong)白值的(de)重復(fu)數(shu)量(liang)，壹般認(ren)為空(kong)白值重復(fu)10次(ci)，測量(liang)均(jun)值接(jie)近(jin)真值。
    方案2是提高(gao)實驗技能(neng)，也(ye)能(neng)夠(gou)有效降低(di)隨機誤(wu)差(cha)的(de)影響(xiang)。如(ru)果CV值在5%，樣(yang)本(ben)值趨(qu)近於(yu)零(ling)時，在(zai)統(tong)計(ji)上樣(yang)本(ben)值將不會(hui)低(di)於空(kong)白值15%。
    2.過失誤(wu)差(cha) Gross Error
    主(zhu)要是由(you)於(yu)測量(liang)者(zhe)的(de)疏(shu)忽，犯(fan)了不應(ying)有(you)的(de)錯(cuo)誤(wu)造成的(de)。過失誤(wu)差(cha)是(shi)可以避(bi)免的(de)。針對於(yu)ELISA樣(yang)本(ben)值低(di)於空(kong)白值的(de)問(wen)題，過失誤(wu)差(cha)產生(sheng)的(de)原因多(duo)數來(lai)源(yuan)於空(kong)白孔(kong)HRP的(de)重復(fu)加(jia)樣(yang)或(huo)汙染(ran)或(huo)洗滌不幹凈，造成空(kong)白值偏高(gao)，相(xiang)對(dui)比(bi)來(lai)說(shuo)，樣(yang)本(ben)值低(di)於空(kong)白值。解(jie)決(jue)方(fang)案就是(shi)重復(fu)實驗，規(gui)範操作(zuo)。當樣(yang)本(ben)值較低(di)接(jie)近(jin)試劑(ji)盒(he)的(de)靈敏度(du)就容(rong)易(yi)發生(sheng)樣(yang)本(ben)值低(di)於空(kong)白值的(de)現(xian)象(xiang)，特(te)別(bie)是(shi)在(zai)血清和血漿樣(yang)本(ben)的(de)檢測(ce)。

  上海(hai)仁捷(jie)生(sheng)物(wu)科技有(you)限公(gong)司(si)是壹家(jia)生(sheng)物(wu)優良(liang)企業(ye)，主要從事免疫學(xue)、分(fen)子(zi)生(sheng)物(wu)學(xue)和常規(gui)生(sheng)化(hua)試劑(ji)的(de)研(yan)發、銷售，本(ben)公(gong)司(si)可為您(nin)提(ti)供(gong)科(ke)研(yan)ELISA試劑(ji)盒(he)，種屬(shu)標本(ben)齊(qi)全(quan),有(you)專(zhuan)門(men)針對人(ren)血清、血漿、全(quan)血、分泌(mi)物、尿液、細(xi)胞培(pei)養上清液(ye)、組(zu)織(zhi)勻漿、組(zu)織(zhi)液(ye)等標本(ben)的(de)試(shi)劑(ji)盒(he)；另(ling)有針對各種動(dong)物（鼠、兔、牛(niu)、馬(ma)、雞、豬(zhu)、狗(gou)、山羊、猴(hou)、魚(yu)）的(de)科(ke)研試(shi)劑(ji)。